CRIM1促進非小細胞肺癌粘附與遷移的功能研究.pdf

1、富含半胱氨酸型運動神經(jīng)元蛋白1（CRIM1）是一類富含半胱氨酸的跨膜蛋白，該蛋白是新發(fā)現(xiàn)的拮抗BMPs蛋白家族的一個成員，早前對于CRIM1的研究主要是在于胚胎和器官發(fā)育以及腎纖維化疾病當中?；谄湓缜皥蟮赖墓δ?，我們推測該蛋白可能在癌細胞的粘附和遷移行為當中有著重要的作用，并可能進一步影響到癌細胞的表皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化行為。
　　本文的主要研究內(nèi)容：
　　檢測在不同轉(zhuǎn)染條件下siRNA轉(zhuǎn)染后的沉默效率，通過qPCR，western

2、blot檢測CRIM1的基因和蛋白的表達量，進而篩選出最適siRNA轉(zhuǎn)染條件。結(jié)果顯示，在轉(zhuǎn)染后48h，轉(zhuǎn)染試劑與siRNA體積比在1:1的情況下，A549中CRIM1的表達水平下調(diào)達到最佳。
　　通過siRNA轉(zhuǎn)染抑制CRIM1表達表達和加入CRIM1多肽誘導處理兩種方式對A549細胞進行處理，用MTT法分析CRIM1對A549細胞增殖能力的影響，結(jié)果顯示CRIM1對A549細胞增殖能力無明顯影響；通過傷痕愈合法分析CRIM1對

3、A549細胞遷移能力的影響，結(jié)果顯示CRIM1對A549細胞遷移能力為正調(diào)控；通過粘附分析法分析CRIM1對A549細胞粘附能力的影響，結(jié)果顯示CRIM1對A549細胞粘附能力為正調(diào)控。得出結(jié)論：CRIM1對A549細胞的遷移和粘附呈正調(diào)控，而對其增殖無顯著影響。
　　鑒于CRIM1可以影響細胞的粘附和遷移行為，因此我們懷疑該蛋白參與細胞EMT。先用TGFβ1誘導A549細胞發(fā)生EMT后，通過進一步實驗分析CRIM1是否參與到A5

4、49細胞EMT的過程當中。結(jié)果顯示CRIM1在EMT過程中呈現(xiàn)蛋白上調(diào)，但CRIM1多肽誘導并不能使細胞發(fā)生EMT。此外，CRIM1的加入也無法誘導和逆轉(zhuǎn)EMT的發(fā)生。CRIM1沉默后蛋白表達結(jié)果顯示CRIM1的沉默可以使N-CAD,E-CAD的蛋白表上調(diào)。得出結(jié)論：CRIM1不能直接誘導細胞發(fā)生EMT，它可能并不直接參與到EMT的過程當中，但是CRIM1的沉默對于N-CAD,E-CAD蛋白的表達有影響。
　　我們構(gòu)建了原癌基因Y