I型AIH患者外周血單核細(xì)胞APRIL、BAFF mRNA的表達(dá)與臨床特點(diǎn)關(guān)系.pdf

1、自身免疫性肝病(autoimmune liver disease,ALID)是自身免疫異常引起的肝臟疾病,但其病因和發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚。臨床常見的主要有3種類型:自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)、原發(fā)性膽汁性肝硬化(primary biliarycirrhosis,PBC)和原發(fā)性硬化性膽管炎(primary sclerosing cholangitis,PSC)。臨床上,常常發(fā)現(xiàn)某種自身免疫性肝病同

2、時(shí)具有或隨后表現(xiàn)出其他種類的自身免疫性肝病的特征,臨床上稱其為自身免疫性肝病重疊綜合征。由于發(fā)病率越來越高以及疾病病因未明、臨床表現(xiàn)出的多樣性、診斷標(biāo)準(zhǔn)及治療終點(diǎn)等諸多方面均有待于進(jìn)一步探討與明確,因此,對(duì)加強(qiáng)本組疾病的探索具有重要的意義。自身免疫性肝病的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明,目前研究結(jié)果顯示是由免疫介導(dǎo)、多種因素參與的復(fù)雜過程。通過前人不斷的研究,最近發(fā)現(xiàn)增殖誘導(dǎo)配體(APRIL)和B淋巴細(xì)胞刺激因子(BAFF)在其中發(fā)揮了重要作用,

3、二者已成為國內(nèi)外學(xué)者研究的熱門課題。自身免疫性肝炎是一種漸進(jìn)性炎癥性肝臟疾病伴有高丙種球蛋白血癥和肝相關(guān)性自身抗體。病人肝臟重要的組織學(xué)發(fā)現(xiàn)是單核細(xì)胞浸潤,即CD8+T細(xì)胞。因此,公認(rèn)的自身免疫性肝炎發(fā)病機(jī)制的假說認(rèn)為環(huán)境因素觸發(fā)了T細(xì)胞介導(dǎo)的對(duì)肝臟自身抗原的瀑布樣級(jí)聯(lián)反應(yīng),導(dǎo)致了肝臟漸進(jìn)的壞死性炎癥和纖維化進(jìn)程。血清細(xì)胞活性因子通過免疫失調(diào)介入了自身免疫性肝炎的發(fā)病機(jī)制。屬于腫瘤壞死因子家族的活化的B細(xì)胞刺激因子是腫瘤壞死因子超家族的

4、一員,它對(duì)B細(xì)胞的存活和分化起重要作用。B細(xì)胞刺激因子由以下幾種細(xì)胞產(chǎn)生,包括單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞。增殖誘導(dǎo)配體是一種新確定的腫瘤壞死因子配體家族成員,由250個(gè)氨基酸殘基組成的Ⅱ型膜蛋白。起初,報(bào)道增殖誘導(dǎo)配體對(duì)腫瘤的生長具有調(diào)節(jié)作用。增殖誘導(dǎo)配體和新近報(bào)道的B細(xì)胞刺激因子具有相似的序列。增殖誘導(dǎo)配體和B細(xì)胞刺激因子的3個(gè)受體中的2個(gè)可以結(jié)合,即B cell maturation antigen(BC

5、MA)and transmembraneactivator and cyclophilin ligand interactor(TACI),配體受體結(jié)合后具有調(diào)節(jié)B細(xì)胞增殖的作用。從以上可知,APRIL和BAFF作為新確認(rèn)的腫瘤壞死因子配體超家族成員對(duì)促進(jìn)B細(xì)胞分化、增殖和未成熟的B淋巴細(xì)胞亞型存活起著作用。
　　本研究初步檢測Ⅰ型自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis typeⅠ,AIH-1)、慢性乙型肝炎(c

6、hronic B hepatitis,HBV)、健康志愿者(healthy controls)外周血中增殖誘導(dǎo)配體(a proliferation-inducing ligand,APRIL)和B淋巴細(xì)胞刺激因子(B cell activating factor belonging to the TNF family,BAFF)mRNA的表達(dá)水平,同時(shí)檢測Ⅰ型自身免疫性肝炎患者生化學(xué)指標(biāo)、免疫學(xué)指標(biāo)、肝活檢病理炎癥與纖維化分級(jí),研究Ⅰ型

7、自身免疫性肝炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)中APRIL和BAFF的表達(dá)水平與AIH-1發(fā)病機(jī)制、疾病活動(dòng)度、預(yù)后之間的關(guān)系。
　　材料與方法：1.提取標(biāo)本中的總RNA并進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄酶PCR,應(yīng)用半定量PCR法檢測37例Ⅰ型AIH確診病人(男3例,女34例,平均年齡49.97歲)、19例慢性乙型肝炎患者(男2例,女17例,平均年齡46.21歲)、15例健康志愿者(男2例,女13例,平均年齡39.47歲)的外周血APRIL和BAFF

8、 mRNA的表達(dá)含量,內(nèi)參為GAPDH。2.用特種蛋白儀檢測AIH-1外周血中IgG、IgM、IgA、CRP、C3、C4、ESR水平。3.Automatic Analyzer檢測ALT、AST、GGT、ALP、GLo水平。4.間接免疫熒光法檢測抗核抗體(ANA)、抗平滑肌抗體(ASMA)滴度。5.采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析APRIL和BAFF mRNA在三組中的表達(dá)差異是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義及其與臨床特點(diǎn)之間的相關(guān)性。
　　結(jié)果

9、：1.APRIL、BAFF mRNA在Ⅰ型AIH中的表達(dá)水平為APPIL mRNA(0.66±0.41)、BAFF mRNA(0.76±0.35),慢性乙肝對(duì)照組為APRIL mRNA(0.33±0.26)、BAFF mRNA(0.33±0.26),健康對(duì)照組為APRIL mRNA(0.30±0.25)、BAFF mRNA(0.23±0.19),實(shí)驗(yàn)組均值水平較兩個(gè)對(duì)照組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.01)。APPIL、BAFF mRN

10、A在兩對(duì)照組中的表達(dá)無顯著差異(P＞0.05)。2.APRIL、BAFF mRNA在AIH-1、慢性乙肝對(duì)照組、健康對(duì)照組中均呈中等強(qiáng)度的正相關(guān),以上結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r=0.418、0.458、0.505,P＜0.05)。3.實(shí)驗(yàn)組Ⅰ型AIH患者外周血中APRIL mRNA的表達(dá)水平與年齡、性別無關(guān),疾病初發(fā)組為0.65±0.39,疾病復(fù)發(fā)組為1.00±0.21,治療后緩解組為0.24±0.10,前兩組與后一組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

11、均＜0.01),而APRIL mRNA在疾病初發(fā)組和疾病復(fù)發(fā)組的表達(dá)無顯著差異(P＞0.05)。4.BAFF mRNA表達(dá)水平在實(shí)驗(yàn)組Ⅰ型AIH患者分別為疾病初發(fā)組0.76±0.36、治療后緩解組0.68±0.25、疾病復(fù)發(fā)組為0.87±0.41,三個(gè)疾病分組中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＞0.05)。5.APRIL、BAFF mRNA表達(dá)水平與疾病活動(dòng)度(生化指標(biāo)、免疫學(xué)指標(biāo)、炎癥分級(jí)及纖維化)指標(biāo)之間無明顯相關(guān)性(P均＞0.05),但BA

12、FF mRNA表達(dá)水平與IgA水平成中度程度正相關(guān)(P＜0.05)。
　　結(jié)論：1.Ⅰ型AIH患者的APRIL、BAFF mRNA的表達(dá)含量較健康者顯著升高。2.APRIL、BAFF mRNA的表達(dá)水平中等程度相關(guān)。3.Ⅰ型AIH患者初發(fā)組和疾病復(fù)發(fā)組患者APRIL mRNA有更高表達(dá)水平,治療后緩解者明顯降低。4.APRIL、BAFF與AIH-1的肝臟損害和疾病發(fā)展有關(guān)。血清APRIL、BAFF水平升高的病人可能作為基因靶向治療