NHL中EBV感染與Ig-TCR克隆重排及其分子特征的研究.pdf

1、EBV屬γ-1型皰疹病毒，與多種腫瘤和非腫瘤性疾病有關(guān)，常見的如霍奇金淋巴瘤(HL)，伯基特淋巴瘤(BL)，免疫缺陷相關(guān)性淋巴瘤、老年性EBV陽(yáng)性DLBCL、鼻型-結(jié)外N/KT細(xì)胞淋巴瘤、傳染性單核細(xì)胞增多癥、慢性活動(dòng)性EBV感染等等。EBV的致病機(jī)制極其復(fù)雜，EBV可能通過自身基因組整合到宿主細(xì)胞基因組中或者表達(dá)其基因產(chǎn)物直接或者間接的引起宿主細(xì)胞的異常。
　　Ig/TCR基因重排是淋巴細(xì)胞發(fā)育成熟的一個(gè)正常生理過程。Ig/TC

2、R基因由染色體上不連續(xù)分布的可變區(qū)(V)、高變區(qū)(D)、結(jié)合區(qū)(J)和恒定區(qū)(C)4部分基因片段組成，V、D和J區(qū)進(jìn)行重排形成具有功能的Ig/TCR基因。在淋巴細(xì)胞的發(fā)育過程中，互補(bǔ)決定區(qū)(CDR3)遭遇抗原的識(shí)別后，免疫球蛋白重鏈(IgVH)發(fā)生體細(xì)胞超突變(SHM)而TCR基因家族發(fā)生選擇性表達(dá)。Ig發(fā)生SHM可用于判斷淋巴細(xì)胞的來(lái)源。TCR基因CDR3片段的多態(tài)性決定了TCR基因的特異性。研究發(fā)現(xiàn)在淋巴瘤中IgVH基因VH片段的使

3、用具有偏向性和TCR基因家族的表達(dá)具有選擇性，這提示了在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中，某一特定抗原或相關(guān)抗原發(fā)生了作用。EBV作為淋巴瘤相關(guān)病毒，探討其與NHL中Ig/TCR基因分子特征及抗原決定區(qū)特征的關(guān)系可能具有重要的意義。
　　我們采用FR3A/LJH/VLJH和FR2A/LJH/VLJH引物及巢式PCR技術(shù)對(duì)50例B-NHL（主要包括DLBCL、FL、MALT、CLL）進(jìn)行Ig基因重排檢測(cè)。用FR3A引物進(jìn)行檢測(cè)，49例為陽(yáng)性，陽(yáng)性

4、率為98.0％;用FR2A引物檢測(cè)，39例呈現(xiàn)陽(yáng)性，陽(yáng)性率為78.0％。用FR3A或者FR2A引物聯(lián)合檢測(cè)，49例陽(yáng)性，陽(yáng)性率98.0％。對(duì)9例NK/T-NHL（主要包括鼻型-結(jié)外NK/T細(xì)胞淋巴瘤、周圍T細(xì)胞淋巴瘤、腸病型T細(xì)胞淋巴瘤）用TCRγ1和TCRγ2引物檢測(cè)，9例均為陽(yáng)性，陽(yáng)性率為100.0％。我們用EBER原位雜交及LMP1 IHC方法檢測(cè)其中的39例B-NHL中EBV感染情況:EBV陽(yáng)性9例，8例為老年人DLBCL。9例

5、NK/T-NHL中7例EBER陽(yáng)性，陽(yáng)性率為77.8％。用熒光染料標(biāo)記引物后行PCR-GeneScan，發(fā)現(xiàn)以FR3A/LJH/VLJH為引物檢測(cè)的31例樣本中，15例(43.8％)為單克隆重排，6例(19.4％)為雙克隆重排，5例(16.1％)為寡克隆重排，5例(16.1％)為多克隆重排;以FR2A/LJH/VLJH為引物檢測(cè)的30例樣本中，21例(70.0％)為單克隆重排，2例(6.6％)為雙克隆重排，3例(10.0％)為寡克隆重排

6、，4例(13.3％)為多克隆重排。以TCRγ1為引物檢測(cè)的6例樣本中，2例單克隆，1例雙克隆，3例多克隆。TCRγ2用引物檢測(cè)的6例樣本中，2例單克隆，4例多克隆。Ig/TCR序列比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)，17例NHL中15例攜帶突變型Ig基因，主要是點(diǎn)突變和核苷酸的替換;且存在VH片段的偏向性使用:16例B-NHL中8例使用VH4基因家族，8例使用VH3基因家族，VH4基因家族中有4例使用VH4-34片段(25.0％)，3例使用VH4-61片段(

7、18.8％)。與我們實(shí)驗(yàn)室前期對(duì)17例DLBCL樣本IgVH基因的研究結(jié)果相似，主要偏向VH3和VH4片段，其中有4例使用VH4-34片段(23.5％)，4例使用VH4-61片段(23.5％)。提示DLBCL的發(fā)生發(fā)展可能與抗原選擇相關(guān)。但與EBV的相關(guān)性仍需擴(kuò)大樣本檢測(cè)。
　　綜上所述，本組實(shí)驗(yàn)NHL中EBV的感染率為42.0％，其中33例DLBCL樣本中9例感染EBV，陽(yáng)性率為27.3％，9例EBV陽(yáng)性病例中8例為老年男人。P

8、CR-GeneScan精確反映DNA片段的大小和數(shù)量，可在PCR-瓊脂糖凝膠電泳初篩檢測(cè)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步明確IgVH重排的類型。但淋巴瘤的診斷還需結(jié)合形態(tài)學(xué)、免疫組化及臨床表現(xiàn)等綜合分析。IgVH基因的突變狀態(tài)有助于確定B細(xì)胞腫瘤的來(lái)源，本組B-NHL病例中2例DLBCL患者攜帶未突變IgVH基因，余為突變型，多為生發(fā)中心或生發(fā)中心后B細(xì)胞來(lái)源。且IgVH基因片段的使用具有明顯的偏向性，VH4-34基因家族使用率為25.0％，VH4-6