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文檔簡介
1、背景:多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是一種惡性漿細(xì)胞疾病,主要表現(xiàn)為惡性漿細(xì)胞增生、單克隆免疫球蛋白增高及相關(guān)器官功能損害。既往研究表明,IL-6細(xì)胞因子家族對MM的發(fā)生、發(fā)展起到關(guān)鍵性作用。gp130是IL-6細(xì)胞因子家族受體系統(tǒng)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)鏈,gpl30激活是骨髓瘤細(xì)胞異常增殖的最重要信號。IL-27是近年發(fā)現(xiàn)的一種新的IL-6/IL-12細(xì)胞因子家族成員,具有復(fù)雜的生物學(xué)功能,在抗感染免疫、抗腫瘤免疫和自身免
2、疫病中發(fā)揮著重要的作用。IL-27作為IL-6/IL-12家族的成員,亦是通過gpl30傳遞信號。IL-27與IL-6共享gp130,難道也在MM發(fā)生發(fā)展中起著促進(jìn)作用,抑或表現(xiàn)出相反的作用。截止目前,尚無關(guān)于IL-27在MM患者體內(nèi)表達(dá)分泌情況及IL-27對骨髓瘤細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的報道。
目的:檢測IL-27在MM患者體內(nèi)表達(dá)及對骨髓瘤細(xì)胞株生物學(xué)活性的影響。
方法:(1)ELISA方法檢測MM患者血漿中IL-27及
3、IL-6水平;(2)ELISA方法檢測骨髓瘤細(xì)胞株U266、RPMI8226培養(yǎng)上清中IL-27水平;(3)采用Ficoll密度梯度離心法分離外周血單個核細(xì)胞(PBMNCs);(4)Real-time PCR方法檢測MM患者PBMNCs中IL-27 mRNA表達(dá)水平;(5)流式細(xì)胞術(shù)檢測U266、RPMI8226細(xì)胞表面IL-27受體(WSX-1/TCCR和gp130)的表達(dá)水平;(6)MTT法及流式細(xì)胞術(shù)測定rhIL-27對U266、
4、RPMI8226細(xì)胞增殖和凋亡的影響;(7) ELISA方法檢測rhIL-27刺激前后U266、RPMI8226細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-6和VEGF水平。
結(jié)果:(1)MM患者血漿IL-27水平為(61.82±8.01)pg/ml,明顯高于正常對照組[(8.29±4.41)pg/ml](P<0.05);MM患者血漿IL-6水平為(45.62±1.24)pg/ml,明顯高于較正常對照組[(2.27±0.18)pg/ml](P<0.0
5、5)。(2)U266、RPMI8226細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-27水平分別為(50.06±5.72)pg/ml和(335.47±41.88)pg/ml。(3)RT-PCR結(jié)果證實MM患者PBMNCs中IL-27 mRNA較正常對照組明顯升高(P<0.05)。(4)流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn) IL-27受體(WSX-1/TCCR和 gp130)在U266、RPMI8226細(xì)胞表面具有很高的陽性表達(dá)率。(5)MTT實驗結(jié)果表明, rhIL-27可顯著抑
6、制U266、RPMI8226細(xì)胞增殖,呈現(xiàn)時間和劑量依賴性;流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)100 ng/mlIL-27處理U266、RPMI8226細(xì)胞72 h后細(xì)胞凋亡率明顯增加(P<0.05)。(6)rhIL-27抑制U266、RPMI8226細(xì)胞分泌IL-6和VEGF(P<0.05)。
結(jié)論:(1)多發(fā)性骨髓瘤患者外周血中IL-27的水平增高,骨髓瘤細(xì)胞株U266、RPMI8226自分泌IL-27。(2)然而,rhIL-27抑制U2
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