大鼠耳蝸氨基糖甙類藥物損傷后出現(xiàn)的新細(xì)胞.pdf

1、目的:對(duì)大鼠耳蝸藥物損傷后出現(xiàn)的新細(xì)胞與小膠質(zhì)細(xì)胞、非典型細(xì)胞(atypical cell)進(jìn)行比較和擴(kuò)展研究,探討新細(xì)胞的代表性及其起源、轉(zhuǎn)歸、以及與神經(jīng)干細(xì)胞或nestin(+)前體細(xì)胞的關(guān)系.方法:采用經(jīng)典的小膠質(zhì)細(xì)胞特殊染色方法——銀染法(Hortega氏碳酸銀法)對(duì)大鼠耳蝸藥物損傷后出現(xiàn)的新細(xì)胞進(jìn)行研究;通過透射電鏡與Marc Lenoir和Philippe Vago實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型中的"非典型細(xì)胞(atypical cell)"

2、進(jìn)行了比較與擴(kuò)展研究;運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)(RT-PCR)檢測(cè)耳蝸基底膜上神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)志物nestin的表達(dá)情況,對(duì)新細(xì)胞的來源及其與神經(jīng)干細(xì)胞或nestin(+)的前體細(xì)胞的關(guān)系作進(jìn)一步研究.結(jié)果:小膠質(zhì)細(xì)胞特殊銀染法光鏡下觀察結(jié)果顯示:作為陽性對(duì)照的大鼠腦組織切片中小膠質(zhì)細(xì)胞與經(jīng)典組織學(xué)描述之分布、形態(tài)相符合,而耳蝸中軸切片未見有類似于小膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞著色.與Marc Lenoir和Philippe Vago實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型中的"非典型

3、細(xì)胞(atypical cell)"進(jìn)行的比較與擴(kuò)展研究顯示:新細(xì)胞在超微結(jié)構(gòu)方面與非典型細(xì)胞存在明顯不同;新細(xì)胞在SD大鼠(幼年和成年)、Wistar大鼠(幼年和成年)與新霉素、阿米卡星藥物的多種交叉比較模型中都重復(fù)出現(xiàn),且超微結(jié)構(gòu)方面無明顯差異.耳蝸基底膜上神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)志物nestin的表達(dá)情況研究發(fā)現(xiàn)在藥物組16天齡大鼠耳蝸基底膜中nestin表達(dá)仍呈陽性,而同期正常對(duì)照組nestin表達(dá)呈陰性.結(jié)論:銀染法不支持新細(xì)胞是小膠質(zhì)細(xì)

4、胞的假說;結(jié)合以往免疫組化(白細(xì)胞共同抗原LCA,CD45)研究的陰性結(jié)果,認(rèn)為可以初步排除小膠質(zhì)細(xì)胞的可能.排除了與Marc Lenoir和Philippe Vago實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型中的"非典型細(xì)胞(atypical cell)"為同一細(xì)胞的可能性.認(rèn)為新細(xì)胞在大鼠耳蝸中出現(xiàn)與耳蝸發(fā)育程度不完全相關(guān),具有較廣泛的代表性.其最早出現(xiàn)時(shí)間為用藥過程中的第4天.支持新細(xì)胞是以往研究中所未曾發(fā)現(xiàn)的一類非凋亡細(xì)胞的推論.形態(tài)學(xué)上需要與另一類高電子密