GIK治療對(duì)嚴(yán)重燙傷腸損傷大鼠NF-ΚB及相關(guān)炎癥因子影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:創(chuàng)傷包括燒(燙)傷后腸道損傷在全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)和多器官功能不全綜合征(MODS)發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。研究創(chuàng)傷后腸道損傷機(jī)理及其保護(hù)措施，非常重要。本實(shí)驗(yàn)以嚴(yán)重燙傷大鼠作為創(chuàng)傷模型，觀察大鼠腸損傷相關(guān)指標(biāo)(血DAO)，腸道促炎因子(TNFα)、抗炎因子(IL-10)和NF-κB基因表達(dá)的變化，并進(jìn)一步研究GIK(葡萄糖-胰島素-氯化鉀)對(duì)嚴(yán)重燙傷大鼠腸道損傷指標(biāo)、腸道炎癥介質(zhì)以及NF-KB的影響，探討炎癥反應(yīng)在創(chuàng)傷

2、腸道損傷中的作用以及GIK抗炎和在創(chuàng)傷腸道保護(hù)中的作用，為GIK防治創(chuàng)傷腸道損傷提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法:健康成年SD(Sprague-Dawley)大鼠42只，雌雄不限，體重200—250g，隨機(jī)分為正常組(n=6)和燙傷組(n=36)。36只燙傷組大鼠采用改進(jìn)型walker和Mason法制作30％體表面積(30％TBSA)Ⅲ度燙傷模型，隨機(jī)分為燙傷對(duì)照組(n=18)和燙傷GIK干預(yù)組(n=18)。 1.燙傷GIK組：燙傷

3、模型制作成功后立即腹腔注射GIK，劑量為20ml/Kg/8h。GIK溶液中胰島素，葡萄糖和氯化鉀終濃度分別為80U/l，100g/l和5g/L。 2.燙傷對(duì)照組：燙傷模型制作成功后立即腹腔注射生理鹽水，劑量為20ml/Kg/8h，其他同GIK組。 3.正常組：除不燙外，其他同燙傷對(duì)照組。燙傷GIK組及其對(duì)照組大鼠于傷后1天、3天和5天，分別觀察創(chuàng)面情況，并采用心臟采血法分批處死(6只/時(shí)相點(diǎn))，離心收集血清，并取腸道組織

4、，進(jìn)行肉眼觀察。血糖采用氧化酶法測(cè)定；血DAO活性采用分光光度終點(diǎn)法測(cè)定。部分腸組織行固定液保存，分別做HE染色和免疫組化，觀察腸組織NF-κB蛋白表達(dá)情況；部分腸組織行RT-PCR，檢測(cè)腸組織NF-κB mRNA、FNFαmRNA和IL-10mRNA的表達(dá)情況。 結(jié)果： 1.創(chuàng)面大體肉眼觀察結(jié)果。燙傷組和GIK組皮膚表面均出現(xiàn)明顯潰瘍；但GIK組與燙傷組相比皮膚出現(xiàn)潰瘍時(shí)間晚，面積小。 2.腸道大體肉眼和病理切

5、片觀察、和血DAO變化結(jié)果。燙傷組和GIK組的腸組織顏色深，腸組織水腫、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、腸上皮細(xì)胞壞死、脫落、腸上皮層同固有層明顯分離，病理評(píng)分顯著高于正常組(P＜0.05)但GIK組上述情況均比燙傷組輕，病理評(píng)分顯著低于正常組(P＜0.05)。燙傷組和GIK組血DAO活性均明顯高于正常組(P＜0.05)，但GIK組血DAO的活性明顯低于燙傷組(P＜0.01)。 3.血糖變化結(jié)果。燙傷組各時(shí)相點(diǎn)血糖明顯高于正常組(P＜0.05)，

6、并與腸道損傷程度正相關(guān)。GIK組1d、5d的血糖明顯低于燙傷組(P＜0.01)，GIK組1d、5d的血糖與正常組無(wú)顯著性差異。 4.腸道組織促炎和抗炎因子基因表達(dá)情況。RT—PCR結(jié)果表明：燙傷組和GIK組TNF α和IL-10mRNA表達(dá)明顯高于正常組(P＜0.01)，但GIK組TNFαmRNA表達(dá)低于燙傷組，IL-10mRNA表達(dá)高于燙傷組(P＜0.01)。 5.腸道組織NF-κB表達(dá)情況。RT—PCR和免疫組化結(jié)果

7、表明：燙傷組和GIK組NF-κBmRNA和蛋白表達(dá)明顯高于正常組，但GIK組NF—κBmRNA和蛋白表達(dá)均明顯低于燙傷組(P＜0.01)。 結(jié)論: 1、嚴(yán)重燙傷大鼠出現(xiàn)明顯腸道損傷和血DAO活性增強(qiáng)。 2、嚴(yán)重燙傷大鼠腸道損傷程度與血糖呈相關(guān)。 3、嚴(yán)重燙傷大鼠腸組織TNFα和IL-10基因表達(dá)失衡以及NF-κB基因過(guò)度表達(dá)在腸道損傷中，發(fā)揮重要作用。 4、GIK治療可通過(guò)：1)降低嚴(yán)重燙傷大鼠血