香葉木苷調控血栓靶蛋白的研究.pdf

1、香葉木苷是從中藥蓬子菜中提取出的黃酮苷類化合物,該藥在抑制癌細胞增殖、降低出血及疼痛方面效果顯著,并且對于輻射引起的氧化損傷有很好的修復作用,目前研究較多的是其在靜脈血栓方面的顯著作用,香葉木苷已被確定為抗血栓的藥效物質。本研究通過分析香葉木苷作用于靜脈血栓而引起的差異靶蛋白,選擇其中顯著變化的蛋白點,再以臍靜脈內皮細胞為研究對象,構建敏感蛋白CEP350的siRNA重組體,獲得干擾蛋白穩(wěn)定表達的臍靜脈內皮細胞株,并檢測該目的基因的表達

2、情況。
　　本研究首先在前期實驗結果基礎上以對照組、模型組和預防組Wistar大鼠的試劑盒純化血液蛋白為研究對象,采用雙向電泳,經PDquest軟件進行分析,尋找其中差異表達的蛋白。雙向電泳實驗結果中一共有307個蛋白表達,其中預防組表達了所有蛋白,模型組表達的蛋白點為91個,只在預防組中表達的蛋白點有137,與模型組比較2倍上調的蛋白點有32個,2倍下調的蛋白有12個,選取10個差異的蛋白點進行基質輔助激光解析飛行時間質譜分析,

3、鑒定了50個蛋白點,其中包括3個未知蛋白。
　　以前期差異顯著的蛋白CEP350為目標蛋白,進行RNAi干擾,將干擾細胞和正常細胞用紅色微管探針染色后在激光共聚焦顯微鏡下觀察其紡錘體的變化,同時對干擾細胞提取RNA后進行反轉錄和qPCR,以檢測目的基因的表達,確定沉默效率。在激光共聚焦顯微鏡下觀察微管及紡錘體的變化,發(fā)現與正常細胞近球形、微管規(guī)則分布相比,干擾組的細胞微管呈放射狀,紡錘體的數目減少,分布雜亂。RNAi干擾使CEP3