煙草花蕾中類Beclin-1基因的分子克隆與鑒定.pdf

1、以不同生長發(fā)育時期的煙草花蕾為材料，利用RT-PCR方法擴增得到與煙草葉片中Beclin-1基因同源的部分cDNA序列，克隆獲得679bp類Beclin-1基因。Northernblotting分析表明，在煙草花蕾發(fā)育中期的類Beclin-1基因的表達信號強，花蕾中期類Beclin-1基因表達高于初期和后期。DNAladder實驗證明了在煙草花蕾發(fā)育過程中出現(xiàn)了標(biāo)志細胞程序性死亡特征的DNA梯狀片斷。結(jié)果表明：在煙草花蕾發(fā)育的進程中，其

2、絨氈層逐漸的退化，花粉不斷形成的這一細胞程序性死亡(programmedcelldeath，PCD)過程。 具體研究結(jié)果如下： 1、本文以不同發(fā)育時期的煙草花蕾為實驗材料。通過CTAB法提取DNA并進行TBE瓊脂糖電泳檢測，結(jié)果表明：在花蕾發(fā)育的過程中出現(xiàn)了標(biāo)志著PCD特征的DNA降解的梯狀圖譜，反復(fù)檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)在花蕾發(fā)育的過程中會產(chǎn)生DNA階梯狀條帶。 2、通過TRIZOL方法提取不同發(fā)育時期的煙草花蕾的RNA

3、。采用RT-PCR法首次從正常發(fā)育的煙草花蕾中克隆得到類Beclin-1基因的cDNA的序列，克隆、測序得到679bp片斷，將擴增的序列進行Blast比對：與煙草葉片受到TMV病毒侵染而誘發(fā)超敏感反應(yīng)相關(guān)的Beclin-1的cDNA序列同源性為97.5％。 3、根據(jù)地高辛雜交試劑盒(羅氏公司)方法，運用了靈敏度、特異性高的RNA作為探針進行Northern雜交，探討在不同發(fā)育時期的煙草花蕾中的類Beclin-1基因的表達情況。結(jié)