鞘磷脂合酶(SMS)的活性對肝細(xì)胞Huh7載脂蛋白A-I分泌和脂質(zhì)含量及分泌的影響.pdf

1、動(dòng)脈粥樣硬化Atherosclerosis,AS)是危害人類健康的最常見的心血管疾病。進(jìn)來研究發(fā)現(xiàn)在AS斑塊處,具有鞘磷脂(SM)的累積,臨床流行病研究顯示血漿sM升高是As的獨(dú)立危險(xiǎn)因子。在SM生物合成過程中,鞘磷脂合酶(SMS)是SM合成關(guān)鍵酶之一。載脂蛋白A-Ⅰ(hpo A-Ⅰ)是一種載脂蛋白,可和膽固醇、甘油三酯及磷脂結(jié)合形成HDL(高密度脂蛋白),在HDL形成過程中可將外周組織的膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入肝臟,即膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)過程(RC

2、T),這樣則可減少AS的發(fā)生率,因此高密度脂蛋白-膽固醇(HDL-C)可作為預(yù)測AS發(fā)生的檢測指標(biāo),由此看來HDL-C在血液中的含量和AS的發(fā)生呈負(fù)相關(guān)。在HDL形成過程中,ApoA-Ⅰ可和膜蛋白ABCA1發(fā)生相互作用,同時(shí)作為膽固醇流出的接受體,形成新生HDL;因此血液中的Apo A-Ⅰ含量也是和AS的發(fā)生呈負(fù)相關(guān)。本研究目的是探討SM、膽固醇及Apo A-Ⅰ之間是否存在關(guān)聯(lián)
　　本文首先構(gòu)建可調(diào)控的Tet-off-SMS調(diào)控系

3、統(tǒng),利用不同劑量的DOX(強(qiáng)力霉素)調(diào)節(jié)SMS的表達(dá),研究發(fā)現(xiàn)Tet-off-SMS系統(tǒng)中SMS-FLAG的表達(dá)及酶活均可受DOX調(diào)控,且呈劑量依賴效應(yīng),差異顯著P＜0.05,而Apo A-Ⅰ的分泌在本實(shí)驗(yàn)劑量依賴范圍內(nèi)沒劑量依賴效應(yīng);但和對照細(xì)胞Huh7-tTA相比,高表達(dá)SMS的肝細(xì)胞Huh7 Apo A-Ⅰ的分泌顯著下調(diào),Huh7細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)Apo A-Ⅰ的含量顯著上調(diào)P＜0.05,而mRNA水平檢測Apo A-Ⅰ的表達(dá),未見顯著性

4、差異P＞0.05。105化合物抑制SMS酶活所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果除mRNA水平檢測未見變化外,SMS低活性促進(jìn)Apo A-Ⅰ的分泌,胞內(nèi)Apo A-Ⅰ含量顯著下調(diào)P＜0.05。
　　同時(shí)本研究還研究了細(xì)胞膽固醇和SM含量的變化,在SMS高表達(dá)的Huh7細(xì)胞胞內(nèi)膽固醇和SM的含量都增加,低活性SMS的Huh7細(xì)胞胞內(nèi)膽固醇和SM含量都降低,且P都＜0.05。
　　為了研究出現(xiàn)出現(xiàn)這種實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可能機(jī)制,本文檢測了和膽固醇流出相關(guān)的膜蛋

5、白ABCA1、ABCGl和SR-BI的mRNA和蛋白水平,結(jié)果顯示和對照(Huh7-tTA)相比SMS高表達(dá)使得ABCA1、ABCG1和SR-BI在mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)都上調(diào)P＜0.05,HMG-CoA還原酶的mRNA表達(dá)下調(diào)P＜0.05;而SMS低活性的Huh7(105處理)細(xì)胞和野生型細(xì)胞(Huh7)相比ABCA1、ABCG1和SR-BI在mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)都下調(diào)P＜0.05,HMG-CoA還原酶mRNA表達(dá)上調(diào)P