壬基酚及其異構體對NCTC Clone1469小鼠肝細胞株的影響.pdf

1、壬基酚（4-n-Nonylphenol，4-n-NP）是生活中廣泛存在的環(huán)境激素，它們在自然環(huán)境中不易降解，具有較強的生物累積性，對于機體內各臟器都具有損害作用，研究4-n-NP及其同分異構體的生物學效應已成為熱點。本文以體外培養(yǎng)的NCTC Clone1469小鼠肝細胞株作為毒理學模型，探討了4-n-NP對NCTC Clo ne1469細胞的毒性作用、氧化應激作用、凋亡作用，以及壬基酚異構體對NCTC Clone1469細胞膽汁酸分泌的

2、影響，為壬基酚及其異構體的環(huán)境風險評估提供理論依據(jù)。
　　首先，本論文探討了4-n-NP對NCTC Clone1469細胞的毒性作用，得出結果如下：（1）60、80、100μmol/L4-n-NP作用于NCTC Clone1469細胞可顯著抑制細胞生長，改變細胞形態(tài)，并導致培養(yǎng)液中LDH、ALT、AST活性顯著升高；（2）4-n-NP（1-40μmol/L）可上調NCTC Clone1469細胞內雌激素受體ERα、ERβmRNA及

3、蛋白表達；（3）雌激素拮抗劑ICI182780無法減弱4-n-NP對NCTC Clone1469細胞的毒性作用。結果表明，4-n-NP可對NCTC Clone1469細胞產(chǎn)生毒性作用，并在一定濃度范圍內可刺激細胞內雌激素受體表達，且兩者無關。
　　第二，本論文從抗氧化酶系統(tǒng)及過氧化產(chǎn)物兩方面綜合探討了4-n-NP對NCTC Clone1469細胞的氧化應激作用，得出結果如下：（1）4-n-NP可使NCTC Clone1469細胞內

4、ROS水平及MDA含量升高；（2）60μmol/L4-n-NP顯著降低NCTC Clone1469細胞內SOD、CAT活性；（3）抗氧化劑NAC可顯著減弱4-n-NP對NCTC Clone1469細胞產(chǎn)生的毒性作用。由此結果推測4-n-NP對NCTC Clone1469細胞產(chǎn)生的毒性作用或與氧化應激作用有關。
　　第三，本論文利用流式雙染法及免疫印跡法探討了4-n-NP對NCTC Clone1469細胞的凋亡作用及潛在機制，得出結

5、果如下：（1）4-n-NP可活化NCTC Clone1469細胞內凋亡相關蛋白酶（Caspase-3、Caspase-12）；（2）20-60μmol/L4-n-NP可上調NCTC Clone1469細胞內促凋亡相關蛋白Bax的表達，同時下調細胞內抗凋亡蛋白Bcl-2的表達；（3）1-60μmol/L4-n-NP藥物組均可導致NCTC Clone1469細胞凋亡率及鈣離子水平升高且具有濃度依賴性；（4）Caspase-3抑制劑Z-DEV

6、D-FMK或Caspase-12抑制劑Z-ATAD-FMK均可抑制NCTC Clone1469細胞凋亡并降低細胞內鈣離子水平。
　　最后，本論文通過酶聯(lián)免疫吸附實驗、反轉錄聚合酶鏈式反應探究12種4-NP異構體對NCTC Clone1469細胞總膽汁酸分泌量及膽汁酸代謝相關基因表達的影響，結果表明60μmol/L4-NP37、4-NP111、4-NP112、4-NP194可使NCTC Clone1469細胞總膽汁酸分泌量顯著升高，

7、并促進細胞內雌激素受體ERα、膽汁酸代謝相關基因（CYP7A1、CYP27A1、C YP8B1）表達，推測此4種壬基酚異構體促使 NCTC Clone1469細胞總膽汁酸分泌量增加或與刺激ERα、CYP7A1、CYP27A1、CYP8B1 mRNA表達有關。
　　綜上所述，本研究明確了4-n-NP對NCTC Clone1469小鼠肝細胞所造成的損傷作用包括細胞毒性、氧化應激及凋亡；4-NP異構體可改變NCTC Clone1469小