狂犬病毒CVS株核蛋白在大腸桿菌中的表達和鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：構建原核表達系統(tǒng)對狂犬病毒(RV)CVS株的核蛋白(NP)進行表達和純化，并在大腸桿菌中表達對其進行初步的抗原性檢測。表達的目的蛋白為進一步研發(fā)狂犬血清學檢測試劑盒提供抗原。 方法：以重組質粒Teasy-RVNP為模板，利用PCR方法擴增狂犬病毒(RV)CVS株核蛋白(NP)的DNA片段，并重組入原核高效表達載體pET-15b。用酶切電泳驗證重組結果的正確性：并通過測序檢查質粒重組后序列有無變化。重組質粒轉化宿主菌BL21

2、，經(jīng)IPTG誘導表達目蛋白進行表達。研究誘導溫度、誘導時間、誘導劑濃度等對表達蛋白量的影響，對蛋白表達條件進行優(yōu)化。并對表達得到得包涵體蛋白進行了洗滌。后用SDS-PAGE與Western-blot鑒定其抗原性。 結果：經(jīng)過篩選得到含狂犬病毒N基因片斷的原核表達載體，測序檢查證明目的基因序列無變化。獲得表達狂犬病毒核蛋白的重組菌，IPTG誘導后SDS-PAGE電泳結果表明，在51KDa，處有一條蛋白表達帶，大小與預期相符。Wes

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