IL-6R抗體調(diào)節(jié)PMMA骨水泥介導(dǎo)的滑膜成纖維細(xì)胞MMPs和血管化因子mRNA表達(dá)的實驗研究.pdf

1、目的:探討IL-6R抗體對PMMA骨水泥介導(dǎo)的滑膜成纖維細(xì)胞MMP-1和MMP-3、VEGF和PDGFmRNA表達(dá)的調(diào)節(jié)。
　　方法:從全髖關(guān)節(jié)置換術(shù)中獲取滑膜組織消化并傳代培養(yǎng)。倒置相差顯微鏡對滑膜細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,免疫細(xì)胞化學(xué)(SABC法)染色對滑膜成纖維細(xì)胞進(jìn)行鑒定。根據(jù)加入不同培養(yǎng)物,實驗分為3組:PMMA組:75μg/mlPMMA骨水泥顆粒;IL-6R抗體組:10ng/mlIL-6R抗體+75μg/mlPMMA骨水泥顆

2、粒;空白對照組。采用細(xì)胞計數(shù)試劑盒-8(CellCountingKit-8,CCK-8)檢測IL-6R抗體、PMMA對滑膜成纖維細(xì)胞增殖活力影響;實時熒光定量PCR(realtimefluorescencequantitativepolymerasechainreaction,FQ-PCR)檢測MMP-1、MMP-3、VEGF和PDGFmRNA表達(dá)。
　　結(jié)果:原代滑膜細(xì)胞貼壁后,初期為短梭形。連續(xù)3次傳代后,95％以上細(xì)胞為長梭

3、形成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞。SABC法染色檢測結(jié)果顯示:上述成纖維樣細(xì)胞抗CD68抗體陰性,抗vimentin抗體呈棕黃色,為陽性反應(yīng)。CCK-8檢測顯示:與PMMA組和空白對照組相比,IL-6R抗體組吸光度(A)值明顯降低(P<0.01);而空白對照組與PMMA組間吸光度(A)值無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。FQ-PCR檢測發(fā)現(xiàn):與PMMA組和空白對照組相比,IL-6R抗體組中MMP-1和MMP-3、VEGF和PDGFmRNA的表達(dá)明顯受到抑