多肽配基定向化固定抗體的研究.pdf

1、抗體經(jīng)常被固定在某一固相介質(zhì)表面用于免疫分析，但由于抗體的固定是隨機(jī)的，導(dǎo)致固定上的抗體活性并不高。后來(lái)有人開(kāi)發(fā)出一些能讓抗體定向固定在固相介質(zhì)表面的方法。本文正是為了開(kāi)發(fā)一種新的抗體定向固定方法，主要是利用與抗體IgG的Fc片段具有親和作用的肽配基來(lái)實(shí)現(xiàn)抗體的定向固定化。
　　本文采用分散聚合法合成了表面為環(huán)氧基團(tuán)的單分散的高分子微球pGMA，通過(guò)對(duì)環(huán)氧基開(kāi)環(huán)、環(huán)氧氯丙烷活化、乙二胺改性以及肽配基HWRGWVC的固定化實(shí)現(xiàn)了對(duì)p

2、GMA微球的表面改性并獲得了具有不同功能基團(tuán)的pGMA微球。在此基礎(chǔ)上，利用粒度分析儀、掃描電子顯微鏡、紅外光譜和反相色譜對(duì)上述微球進(jìn)行了系統(tǒng)表征。粒度分析結(jié)果表明，制得了約1.6μm的單分散微球，在掃描電子顯微鏡下呈均一球形，且表面光滑無(wú)孔。紅外光譜和反相色譜結(jié)果表明各種表面修飾是成功的。IgG靜態(tài)吸附結(jié)果表明，IgG能夠吸附在固定有肽配基的微球表面，吸附容量為3-4 mg/g?；钚詼y(cè)定表明肽配基法固定的活性抗體比率（活性抗體/固定抗

3、體）高于化學(xué)EDC法。
　　在此基礎(chǔ)上，本文利用乳液聚合法制備了粒徑為110 nm的pGMA納米球，引入EDMA交聯(lián)劑能夠更好地促進(jìn)納米球在水溶液中的穩(wěn)定性。通過(guò)納米球表面氨基的引入，本文成功地將肽配基 HWRGWV偶聯(lián)于納米球表面，合成了具有抗體定向固定功能化的納米球。最后，本文考察了功能化納米球?qū)ωiIgG的吸附行為，進(jìn)而利用ITC研究了功能化納米球與IgG的相互作用。結(jié)果表明，功能化納米球和氨化納米球均對(duì)IgG有吸附作用，但前