小鼠自體皮膚成纖維細胞皮內(nèi)注射后存活情況的雙光子顯微鏡觀察及研究.pdf

1、目的：研究和建立較為理想的小鼠皮膚成纖維細胞體外分離、培養(yǎng)、鑒定及注射移植的技術(shù)方法。通過雙光子顯微鏡觀察體外培養(yǎng)的成纖維細胞皮內(nèi)注射移植后的長期存活情況，了解膠原纖維等基質(zhì)成分的變化，為臨床應用自體真皮成纖維細胞進行軟組織填充的可行性提供可靠的理論基礎(chǔ)。 方法：用組織塊法對每只小鼠皮膚成纖維細胞進行原代培養(yǎng)，消化加反復貼壁法純化細胞。倒置相差顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)學特征，并作波形蛋白(vimentin)抗體免疫細胞化學染色及染

2、色體分析。生產(chǎn)EGFP慢病毒液，并用其轉(zhuǎn)染培養(yǎng)的成纖維細胞，倒置熒光顯微鏡下觀察EGFP的表達情況。將轉(zhuǎn)染成功的細胞注射移植到相應來源的小鼠皮內(nèi)，生理鹽水作陰性對照。分別于注射1個月、2個月后取材，標本行連續(xù)冰凍切片，用雙光子顯微鏡觀察細胞及膠原的變化，對膠原的分布面積比值和真皮厚度作圖象分析，并對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析處理。 結(jié)論： 1．組織塊培養(yǎng)法簡便、經(jīng)濟，該法所獲得的成纖維細胞可在體外穩(wěn)定培養(yǎng)，為皮內(nèi)注射移植提供了