抗人FcεRIα FaB-聚合物膠束-雷公藤紅素誘導肥大細胞凋亡過敏性疾病.pdf

1、研究目的:構建偶聯(lián)抗人FcεRIα Fab包裹雷公藤紅素的聚合物膠束（抗人FcεRIα Fab-聚合物膠束-雷公藤紅素三聚物），分析其對肥大細胞的靶向性、增殖抑制及促凋亡作用，探討其在過敏性哮喘小鼠體內的分布及對哮喘和被動皮膚過敏反應的抑制效果。
　　研究方法:①采用薄膜水化法制備雷公藤紅素-聚合物膠束，EDC偶聯(lián)法構建抗人FcεRIα Fab-聚合物膠束-雷公藤紅素三聚物，采用粒度分析儀、透射電子顯微鏡分別觀察膠束的粒徑和形態(tài)，

2、反相-高效液相色譜法測定其包封率和載藥量。②體外以人外周血嗜堿性白血病細胞KU812(表面高表達FcεRI，靶細胞)和人未成熟肥大細胞HMC-1（表面幾乎不表達FcεRI，非靶細胞）為研究對象，以香豆素6為探針，采用流式細胞儀和激光共聚焦顯微鏡檢測三聚物的靶向作用;CCK-8法測定細胞增殖抑制率，Annexin V-FITC/PI雙標記合并流式細胞儀定量分析凋亡細胞比率，酶法和免疫印跡分別檢測凋亡分子caspase3活性和切割的PARP

3、表達水平，分析三聚物對肥大細胞增殖抑制及凋亡作用。③以卵清蛋白免疫BABL/c小鼠建立哮喘模型，以近紅外熒光素DiR為探針，觀察三聚物在過敏性哮喘小鼠體內的分布及其對肺組織的靶向性;給予三聚物干預治療，ELISA法檢測血清OVA特異性IgE（OVA-sIgE）和肺泡灌洗液(BALF)組胺的水平，采用Luminex技術測定BALF中Th1/Th2細胞因子的含量，計數(shù)BALF白細胞總數(shù)及嗜酸性粒細胞數(shù)，觀察肺組織炎癥情況，分析三聚物對過敏性

4、哮喘的治療效果。此外，通過皮內注射IgE-DNP和尾靜脈注射DNP-HSA誘導小鼠被動皮膚過敏反應，給予三聚物干預治療，觀察伊文氏藍擴散程度，驗證三聚物對過敏反應的抑制作用。
　　研究結果:①制備了抗人FcεRIα Fab-聚合物膠束-雷公藤紅素三聚物，包封率為98.9±3.3％，載藥量為22.8±1.0％，粒徑在93.43nm左右，分布均勻，呈短棒狀或橢圓狀。②流式細胞儀和激光共聚焦顯微鏡檢測結果顯示抗人FcεRIα Fab-聚

5、合物膠束進入靶細胞的量顯著高于未偶聯(lián)抗體的膠束;細胞增殖和凋亡的結果表明抗人FcεRIα Fab-聚合物膠束-雷公藤紅素三聚物作用組的肥大細胞抑制率、凋亡細胞比例、caspase3活性和切割的PARP水平均顯著高于單純的雷公藤紅素和雷公藤紅素-聚合物膠束組。③體內研究結果表明，三聚物能促進藥物在過敏性哮喘小鼠的肺組織聚集，并有效地減少哮喘小鼠血清OVA-sIgE、BALF組胺和Th2細胞因子(IL-4、IL-5、IL-13和TNF-α)

6、的合成，增加抗炎因子IL-10的分泌，降低BALF白細胞和嗜酸性粒細胞數(shù)量，減輕肺組織炎細胞浸潤和黏液分泌;此外三聚物能有效減少伊文氏藍的滲出，降低血管通透性，減輕小鼠被動皮膚過敏反應。且三聚物的抗過敏效果明顯比單純的雷公藤紅素和雷公藤紅素-聚合物膠束組更強。
　　研究結論:成功構建了抗人FcεRIα Fab-聚合物膠束-雷公藤紅素三聚物，該三聚物具有良好的表征和肥大細胞靶向性，能特異地抑制肥大細胞增殖、誘導其凋亡;在體內能促進藥