腎包膜下移植及轉(zhuǎn)錄因子Cdx2對內(nèi)耳毛細胞分化或再生的研究.pdf

1、本文利用不同時期內(nèi)耳細胞和組織進行以下兩部分研究：
　?。ㄒ唬┡咛テ趦?nèi)耳單細胞在腎包膜下自發(fā)性組合成內(nèi)耳上皮樣結構的研究
　　微環(huán)境、細胞與細胞之間的相互作用在胚胎發(fā)育中扮演著重要的角色，對干細胞干性的維持和分化是不可或缺的。內(nèi)耳感覺上皮包含支持細胞和毛細胞，這些細胞由胚胎早期聽泡中的干細胞分化而來。然而，胚胎內(nèi)耳組織的微環(huán)境、細胞與細胞之間的相互作用是否可以調(diào)節(jié)干細胞的增殖和分化，是否能夠自發(fā)性的組合成內(nèi)耳感覺上皮仍不得而

2、知。本研究采用酶消化法分離出胚胎13.5天內(nèi)耳組織中所有的單細胞，移植于腎包膜下，發(fā)現(xiàn)這些游離的細胞最早能夠在移植7天后重新聚集形成感覺上皮樣結構，至移植后25天，可以形成更成熟的內(nèi)耳感覺上皮。同時，細胞類型特有的標志物的免疫熒光染色顯示不僅形成了毛細胞和支持細胞，而且毛細胞有規(guī)則的排列在支持細胞的上面一層。這些研究進一步顯示胚胎期內(nèi)耳組織中的微環(huán)境、細胞與細胞之間的相互作用有自主的信號通路能夠誘導感覺上皮結構的形成。本研究為干細胞分化

3、成毛細胞的體內(nèi)研究提供了可以借鑒的系統(tǒng)。
　　(二)異位表達Cdx2對內(nèi)耳毛細胞再生的作用
　　耳蝸毛細胞為終末分化細胞，能夠?qū)㈦姶碳まD(zhuǎn)化為電信號，傳導到中樞神經(jīng)系統(tǒng)，產(chǎn)生聽力。哺乳動物的耳蝸毛細胞易受感染、耳毒性藥物、噪音、基因突變等影響，再生能力很弱。目前，對毛細胞再生的基礎研究主要集中在干細胞分化和轉(zhuǎn)分化方面。
　　然而，我們發(fā)現(xiàn)尾型同源盒轉(zhuǎn)錄因子Cdx2在胃腸上皮化生中發(fā)揮重要作用。正常情況下，Cdx2局限表達

4、在十二指腸、結腸和直腸，可以作為病理診斷中的特異性標記物。當發(fā)生胃腸上皮化生時，胃部會有腸型上皮的表達，會出現(xiàn)Cdx2的表達，同時會引起Math1的過表達和Sox2的表達量降低。而Math1和Sox2的表達量對內(nèi)耳毛細胞的再生和分化起著相當重要的作用。
　　因此，我們目前工作重點放在異位表達Cdx2對內(nèi)耳毛細胞再生及其潛在機制的研究。通過Cdx2腺病毒感染和質(zhì)粒電轉(zhuǎn)染耳蝸上皮兩種方法來研究.目前我們發(fā)現(xiàn)，腺病毒感染耳蝸上皮組織7天