雙組份信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)CpxAR對鼠傷寒沙門菌致病性的調(diào)控作用.pdf

1、沙門菌病是引起養(yǎng)殖業(yè)的主要細菌病之一，禽畜感染沙門氏菌可引起相應(yīng)的傳染病，如豬霍亂、雞白痢等，而且該菌污染肉類食品后，可進入人類食物鏈而引發(fā)人類食物中毒，對人類的健康有著巨大的威脅。本試驗?zāi)康脑谟谘芯侩p組份信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)cpxAR對鼠傷寒沙門菌致病性的調(diào)控作用，為控制其嚴重的致病性尋找出路，也為減毒活疫苗的研究奠定基礎(chǔ)。
　　1.本研究通過ERIC-PCR、MLST分型技術(shù)篩選流行克隆株JS分，應(yīng)用噬菌體轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)構(gòu)建基因缺失突變株J

2、S分△cpxR，并進行Js標、JS標△cpxR、JS分、JS分△cpxR小鼠致病性試驗。LD50結(jié)果顯示：JS標△cpxR突變株與親本株Js標相比，LD50升高了1.36倍，JS分△cpxR突變株與親本株Js分相比。LD50升高了17.54倍，基因缺失突變株LD50均升高。上述試驗結(jié)果表明：cpxR基因與細菌毒力具有緊密的相關(guān)性，影響著細菌的致病特性。
　　2.測定標準菌JS標、JS分及其缺失株JS標△cpxR、JS分△cpxR黏

3、附、侵襲PK—15細胞的能力。結(jié)果表明：流行克隆株JS分的黏附、侵襲力很強，其黏附力、侵襲力均高于標準菌株。缺失cpxR后，受試菌黏附、侵襲能力均顯著下降，本試驗中標準菌株、流行克隆cpxR缺失后的對PK-15細胞的黏附量分別較缺失前的親本菌株分別降低了1.35、2倍，侵襲量分別降低了3.4、3倍，表明cpxR基因與鼠傷寒沙門菌黏附侵襲能力密切相關(guān)。
　　3.通過熒光定量PCR技術(shù)，對7株不同來源的菌株及其cpxR基因缺失株的11

4、個相關(guān)毒力基因的mRNA表達水平進行的檢測，結(jié)果表明：鼠傷寒沙門菌中與毒力相關(guān)的基因hilD、sopD、fur、invA、sopE2、ssrA、spvC、hilA、invF、sopB、sipA在JS標△cpxR的mRNA表達量與JS標相比總體呈下降趨勢，然而在臨床分離菌cpxR基因缺失株6△cpxR、18△cpxR、25′△cpxR、35△cpxR、57△cpxR、69△cpxR、110△cpxR號菌株中的相對表達量與6、18、25′、

5、35、57、69、110號菌株相比較，fur、spvC在臨床菌株cpxR缺失株中呈總體下降趨勢，而sipA、hilA、invF、sopB、hilD、sopD、invA、sopE2、ssrA在6△cpxR、18△cpxR、25′△cpxR、35△cpxR中呈小幅下降趨勢，在57△cpxR、69△cpxR、110△cpxR號菌株中表達量卻上升及其顯著，高至354.6倍，變化呈現(xiàn)多樣性，提示cpxR基因與鼠傷寒沙門菌的致病性有密切關(guān)系，但在臨