Fis對(duì)傷寒沙門(mén)菌基因表達(dá)的系統(tǒng)調(diào)節(jié)作用.pdf

1、江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文Fis對(duì)傷寒沙門(mén)菌基因表達(dá)的系統(tǒng)調(diào)節(jié)作用姓名：李安平申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)指導(dǎo)教師：黃新祥20100608江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文至大腸埃希菌TGl中篩選陽(yáng)性質(zhì)粒，經(jīng)序列分析鑒定后將陽(yáng)性重組載體及空載體分別轉(zhuǎn)入加基因缺陷變異株，作為加基因缺陷回補(bǔ)株和對(duì)照株。(5)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRTPCR)分析：選擇部分表達(dá)差異基因，設(shè)計(jì)并合成特異性引物，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，驗(yàn)證DNA芯片分析結(jié)果；(6)動(dòng)力實(shí)

2、驗(yàn)分析：用半固體平板培養(yǎng)觀察野生株、加缺陷變異株和回補(bǔ)株的動(dòng)力；(7)加基因的克隆與表達(dá)：根據(jù)加基因兩端序列設(shè)計(jì)引物，以傷寒沙門(mén)菌基因組為模板，通過(guò)PCR擴(kuò)增獲得不含啟動(dòng)子及終止子區(qū)域的加基因編碼區(qū)DNA片段，構(gòu)建表達(dá)載體pBAD／Fis，轉(zhuǎn)入大腸埃希菌Topl0中，用L邛_ⅡJ拉伯糖誘導(dǎo)加基因的表達(dá)，Ni柱純化Fis蛋白。結(jié)果：(1)PCR及序列分析證實(shí)，加基因缺陷變異株中基因159bp被6bp取代，表明成功構(gòu)建加基因缺陷變異株；(2