多發(fā)性骨髓瘤患者Toll樣受體表達(dá)及功能的研究.pdf

1、蘇州大學(xué)博士學(xué)位論文多發(fā)性骨髓瘤患者Toll樣受體表達(dá)及功能的研究姓名：徐楊申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（血液病學(xué)）指導(dǎo)教師：吳德沛20100301中文摘要 多發(fā)性骨髓瘤患者T o l l 樣受體表達(dá)及功能的研究二、L P S 和C p G D N A 對M M 細(xì)胞增殖和凋亡影響和機(jī)制的研究目的初步探討L P S 和C p G D N A 對M M 細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其機(jī)制。方法M ’丌方法檢測P a m 3 C s k 4 ，

2、L P S 和C p GD N A 刺激后原代M M 細(xì)胞，M M細(xì)胞系R P M I ．8 2 2 6 以及X G ．7 細(xì)胞增殖水平。A n n e x i n V 抗體檢測無血清培養(yǎng)狀態(tài)下予L P S 和C p G D N A 刺激后原代M M 細(xì)胞，R P M I ．8 2 2 6 細(xì)胞以及X G ．7 細(xì)胞的凋亡。E L I S A 檢測培養(yǎng)細(xì)胞上清中I L ．6 水平，I L ．6 中和性抗體封閉后，M T T 方法檢測原代

3、M M 細(xì)胞，R P M I ．8 2 2 6 細(xì)胞和X G ．7 細(xì)胞的生長。結(jié)果L P S 和C p GD N A 刺激后原代M M 細(xì)胞，R P M I ．8 2 2 6 細(xì)胞以及X G ．7 細(xì)胞增殖水平較對照組以及P a m 3 C s k 4 組高。P a m 3 C s k 4 ，L P S 和C p GD N A 并不能顯著促進(jìn)正常的漿細(xì)胞的增殖。在血清饑餓的情況下，原代M M 細(xì)胞，R P M I ．8 2 2 6 細(xì)

4、胞以及X G ．7 細(xì)胞都表現(xiàn)出了一定比例的凋亡，P a m 3 C s k 4 刺激并不能顯著的減少凋亡細(xì)胞的比例，而L P S 和C p G D N A 則可以顯著地保護(hù)細(xì)胞凋亡。對于正常的漿細(xì)胞，則在P a m 3 C s k 4 ，L P S 和C p GD N A 三組中，凋亡細(xì)胞的比例變化則不明顯。E L I S A 檢測L P S 和C p G D N A 刺激后的原代M M 細(xì)胞，R P M I ．8 2 2 6 細(xì)胞以

5、及X G ．7 細(xì)胞上清中的I L ．6 ，可以觀察到L P S 和C p G D N A 可以顯著的增強(qiáng)培養(yǎng)細(xì)胞上清中的I L ．6 水平。預(yù)先使用I L ．6 中和性抗體封閉，M T T 法檢測M M 細(xì)胞的增殖，結(jié)果提示與正常I g G比較，I L ．6 中和性抗體可以降低T L R 介導(dǎo)的M M 細(xì)胞的增殖。結(jié)論L P S 和C p G D N A 可以顯著地促進(jìn)M M 細(xì)胞的增殖，同時L P S 和C p G D N A可以顯

6、著地保護(hù)M M 細(xì)胞在血清饑餓誘導(dǎo)的凋亡。L P S 和C p GD N A 可以促進(jìn)M M細(xì)胞上清中I L ．6 的分泌，并且預(yù)先加入中和性I L ．6 的抗體則可以阻斷L P S 和C p GD N A 促進(jìn)M M 細(xì)胞增殖的作用。三、L P S 和C p G D N A 促進(jìn)M M 細(xì)胞生長相關(guān)信號通路的研究目的初步探討L P S 和C p GD N A 對M M 促進(jìn)M M 細(xì)胞生長可能依賴的信號通路。方法在相應(yīng)的信號通路抑制劑

7、存在下，M 1 v r 方法檢測L P S 和C p G D N A 刺激后U 2 6 6 及R P M I 一8 2 2 6 細(xì)胞增殖。W e s t e r n 方法檢測相應(yīng)的信號分子的激活。細(xì)胞核漿分離方法檢測N F ．K B P 6 5 亞基入核水平，M T T 方法檢測在N F ．K B 激活和抑制情況下U 2 6 6 及R P M I ．8 2 2 6 細(xì)胞增殖，定量P C R 檢測在N F ．K B 激活和抑制情況下U 2