葡萄籽原花青素對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化后神經(jīng)元樣細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：探討葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidins，GSP)對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bonemarrow messenehymal stem cells，BMSCs)誘導(dǎo)分化后神經(jīng)元樣細(xì)胞是否具有抗凋亡作用及作用的最適劑量。
　　 方法：BMSCs由成年健康雄性WISTAR大鼠股骨全骨髓法取得，經(jīng)貼壁培養(yǎng)法分離純化，取第五代BMSCs用低中高劑量(20mg/L、40mg/L、80mg/L)GSP干預(yù)2

2、4 h，設(shè)立空白對(duì)照組。以含有20％胎牛血清的1mmol/LB-巰基乙醇(BME)預(yù)誘導(dǎo)24 h后，繼而用含有40ng/mL堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)的無(wú)血清培養(yǎng)基作為誘導(dǎo)液誘導(dǎo)24 h。采用免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定神經(jīng)細(xì)胞特異性抗原標(biāo)記神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuronspecificenolase，NSE)和微管相關(guān)蛋白-2(microtubule-associated protein2，MAP-2)的表達(dá)。MTT法檢測(cè)不同劑量的

3、GSP干預(yù)24 h后對(duì)神經(jīng)元樣細(xì)胞活力的影響，流式細(xì)胞儀檢測(cè)以Fluo-3 AM為熒光探針標(biāo)記的細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度，以Annexin V凋亡試劑盒檢測(cè)組間細(xì)胞凋亡率。
　　 結(jié)果：成功分離培養(yǎng)WISTAR大鼠BMSCs，經(jīng)誘導(dǎo)分化后大部BMSCs變成神經(jīng)元樣細(xì)胞并表達(dá)NSE和MAP-2。GSP干預(yù)組細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，活力及存活細(xì)胞比例較好。
　　 結(jié)論：GSP能使BMSCs誘導(dǎo)分化后神經(jīng)元樣細(xì)胞保持較好的活力，對(duì)抗自由基產(chǎn)生，