2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、目的:CD4+ CD25+調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞(regulatory T cell,Treg)是機(jī)體重要的免疫調(diào)節(jié)功能細(xì)胞,能下調(diào)免疫反應(yīng)維持機(jī)體免疫耐受,它在腫瘤免疫、移植免疫和自身免疫病中均發(fā)揮重要作用。但Treg 細(xì)胞在胃癌不同類型組織的表達(dá)情況及增高機(jī)制尚未闡明。通過(guò)本研究擬探討:建立體內(nèi)調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞準(zhǔn)確的檢測(cè)方法;研究調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞在不同分期胃癌患者外周血、腹水、腫瘤組織、癌旁淋巴結(jié)等不同部位的分布特點(diǎn)及意義;初步探索調(diào)節(jié)性T 細(xì)

2、胞在胃癌中特異性增高的機(jī)制。從而進(jìn)一步揭示免疫逃逸機(jī)制及發(fā)掘Treg 細(xì)胞潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。 方法:利用Foxp3 特異的單克隆抗體和Treg 細(xì)胞膜表面特性,分別建立Foxp3-FITC 、CD25-PE 、CD4-PerCP 、CD3-APC 及CD25-FITC 、CD127-PE 、CD4-PerCP、CD3-PC7 兩種4 色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Treg 細(xì)胞的方法,比較二者同一性。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分選Treg 細(xì)胞,RT

3、-PCR 檢測(cè)Foxp3 mRNA 的表達(dá),探討Foxp3mRNA 和蛋白水平的一致性。應(yīng)用Foxp3 胞漿染色和CD25,CD127 膜表面染色流式細(xì)胞術(shù),檢測(cè)60 例不同分期胃癌患者外周血、腹水、腫瘤組織、癌旁淋巴結(jié)、正常組織中Treg 的表達(dá)情況,Real Time RT-PCR 技術(shù)檢測(cè)外周血Foxp3 mRNA 水平表達(dá)情況。收集39 例不同分期胃癌患者血清和腹水上清液,應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)TGF-β1、PG

4、E2、IFN-γ、IL-4 等細(xì)胞因子的表達(dá)水平,研究胃癌免疫狀態(tài)及抑制因子在Treg 細(xì)胞增高的作用。 結(jié)果:1. Treg 細(xì)胞不同水平檢測(cè)方法學(xué)的確立:建立鑒定Foxp3 mRNA 的反轉(zhuǎn)錄PCR 體系;建立應(yīng)用Foxp3-FITC/CD25-PE/CD4-PerCP/CD3-APC 及CD25-FITC/CD127-PE/CD4-PerCP/CD3-PC7 兩種4 色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Treg 細(xì)胞的方法;應(yīng)用Fxop3

5、胞漿染色與CD25high CD127low 膜表面染色鑒定Treg 細(xì)胞具有一致性(相關(guān)系數(shù)r=0.983,P<0.01);Treg 細(xì)胞特異性基因Foxp3 的mRNA 和蛋白水平均有表達(dá)。2.不同分期胃癌患者外周血、腹水、腫瘤組織、癌旁淋巴結(jié)等組織中調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞的表達(dá):應(yīng)用相對(duì)定量Real Time PCR 方法對(duì)外周血Foxp3 mRNA 進(jìn)行檢測(cè),發(fā)現(xiàn)在腫瘤患者外周血中Foxp3 的表達(dá)高于正常對(duì)照(P<0.05),F(xiàn)oxp

6、3mRNA 表達(dá)量隨著腫瘤進(jìn)展而升高,TNMⅠ病人外周血Foxp3 mRNA 即有顯著增高;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各期胃癌外周血Treg 細(xì)胞占CD4+ T 細(xì)胞的比例顯著高于正常對(duì)照(P<0.05),正常組織未見(jiàn)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。腹水、腫瘤、淋巴結(jié)中都存在較高水平的Treg 細(xì)胞;在外周血和腹水組織中,CD25+與Foxp3+的相關(guān)系數(shù)為-0.052,二者無(wú)相關(guān)性;而CD25high 與Foxp3+的相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.731,P<0.01,二者顯著

7、相關(guān),在腫瘤組織和癌旁淋巴結(jié)中,CD25+與Foxp3 的相關(guān)系數(shù)為0.807,P<0.01,二者顯著相關(guān);CD25high 與Foxp3 的相關(guān)系數(shù)為0.608,P<0.01,二者顯著相關(guān);各組織類型的調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞占CD4+T 細(xì)胞的比例呈現(xiàn)出下列模式:腫瘤組織>癌旁淋巴結(jié)>腹水組織>外周血>健康對(duì)照外周血;胃癌早期患者外周血中調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞的數(shù)目相比正常對(duì)照未現(xiàn)差異,晚期相比早期顯著增加(P<0.05);在腹水和腫瘤組織中,Tre

8、g 細(xì)胞在晚期患者相比早期有顯著升高(P<0.05);在癌旁淋巴結(jié)中,調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞的數(shù)目在TNM 各期均未見(jiàn)顯著差異。3.不同分期胃癌患者血清和腹水上清中細(xì)胞因子的表達(dá):IFN-γ在患者腹水上清的表達(dá)與正常對(duì)照相比,顯著升高(P<0.05),晚期患者相比早期患者,IFN-γ表達(dá)水平顯著下降,(P<0.05);各期胃癌患者血清和腹水中IL-4 的表達(dá)相比對(duì)照顯著上升(P<0.05),晚期與早期相比,腹水上清中IL-4 表達(dá)水平顯著下降,

9、(P<0.05); IFN-γ/ IL-4 在患者體內(nèi)相比健康對(duì)照顯著下降(P<0.05),晚期相比早期無(wú)顯著差異;TGF-β1 在各期胃癌血清和腹水上清相比正常對(duì)照顯著下降(P<0.05),晚期相比早期,血清TGF-β1 顯著上升(P<0.05),晚期患者TGF-β1 水平與Treg 細(xì)胞顯著相關(guān)( P<0.05 );各期胃癌患者腹水PGE2 的表達(dá)水平相比正常對(duì)照顯著上升( P<0.05 ),晚期患者與早期相比,腹水上清中PGE2

10、表達(dá)水平顯著上升(P<0.05),各期患者PGE2 水平與Treg 細(xì)胞水平顯著相關(guān)(P<0.05)。 結(jié)論:(1)CD4+CD25+Foxp3+T 細(xì)胞是體內(nèi)獨(dú)特的調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞(Treg)亞群,CD4+CD25high CD127low 表面標(biāo)記與CD4+CD25+Foxp3+相一致,可作為有效膜標(biāo)志鑒定、篩選Treg 細(xì)胞。(2)胃癌患者相比健康人體內(nèi)存在高水平的Treg 細(xì)胞,Treg 細(xì)胞在腫瘤局部分布數(shù)量大于外周組

11、織,具體數(shù)量在各組織類型呈現(xiàn)出固有模式:腫瘤組織>癌旁淋巴結(jié)>腹水組織>外周血。(3)不同分期胃癌患者外周血、腹水、腫瘤組織、癌旁淋巴結(jié)中Treg 細(xì)胞相對(duì)含量隨腫瘤進(jìn)展逐漸升高,Treg 細(xì)胞相對(duì)含量與胃癌分期關(guān)聯(lián)密切,有助于我們進(jìn)行胃癌進(jìn)展判斷。(4)腫瘤局部與外周組織中的Treg 細(xì)胞表面標(biāo)志存在差異,腫瘤局部組織為CD4+ CD25high T 細(xì)胞,在外周則表現(xiàn)為CD4+ CD25+ T 細(xì)胞。(5)胃癌患者免疫狀態(tài)發(fā)生混亂,

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