血液介導(dǎo)的即刻炎性反應(yīng)(IBMIR)與異綱(羅非魚-小鼠)胰島移植.pdf

1、目的：
　　 1.觀察羅非魚胰島肝內(nèi)移植對(duì)糖尿病小鼠的治療作用。
　　 2.觀察羅非魚胰島肝內(nèi)移植與血液介導(dǎo)的即刻炎癥反應(yīng)的關(guān)系。
　　 3.觀察炎性細(xì)胞及NK細(xì)胞在異綱移植免疫排斥中的作用。
　　 4.探討不同綱動(dòng)物間胰島細(xì)胞移植可行性及免疫排斥機(jī)理。
　　 材料和方法：
　　 1.以膠原酶消化法分離羅非魚胰島細(xì)胞，再采用手工物理分離法和低速離心法純化胰島。
　　 2.應(yīng)用光學(xué)顯

2、微鏡觀察羅非魚胰島形態(tài)。采用臺(tái)盼藍(lán)染色法進(jìn)行胰島活性的鑒定。
　　 3.以鏈脲佐霉素(STZ.Streptozotocin)往小鼠腹腔內(nèi)注射，建立小鼠藥物性糖尿病模型。
　　 4.隨機(jī)把糖尿病小鼠分為兩組，即實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組。對(duì)兩組糖尿病小鼠分別在肝臟內(nèi)注射羅非魚胰島及生理鹽水。于移植后1小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)和3天觀察小鼠血糖的變化：并在移植后1小時(shí)、12小時(shí)及24小時(shí)分別處死1只受體取鼠的肝臟標(biāo)本。對(duì)移植物進(jìn)行病理檢

3、查和免疫組化檢測(cè)。
　　 結(jié)果：
　　 1.平均每一條450～550g的羅非魚大約可分離到1～2個(gè)直徑為2～5mm左右的胰島，2～3個(gè)直徑為0.5～1mm的胰島，8～10個(gè)直徑為0.1～0.3mm的胰島，臺(tái)盼藍(lán)染色法以及雙硫腙.Dithizone，DTZ)染色法顯示胰島的存活率大于90％。
　　 2.移植后受體的血糖檢測(cè)：對(duì)照組糖尿病小鼠在移植后1h時(shí)血糖濃度為(26.06±3.06.mmol/L，觀察期內(nèi)一直呈

4、現(xiàn)出高血糖的持續(xù)狀態(tài)。移植后1h時(shí)，移植組的血糖水平有明顯的下降，濃度為(9.34±3.05.mmol/L，與作為對(duì)照組相比有顯著性差異(P<0.05)。移植后12h時(shí)，實(shí)驗(yàn)組的血糖水平仍有繼續(xù)的下降，濃度為(7.8±2，10.mmol/L，與作為對(duì)照組相比有顯著性差異(P<0.05)。但在移植后24h時(shí)血糖濃度為(28.13±1.56.mmol/L，與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
　　 3.組織學(xué)檢測(cè)：
　　

5、 實(shí)驗(yàn)組：在移植后12h，病理檢查可見移植物周圍有輕度的炎癥反應(yīng)，有炎癥細(xì)胞的聚集，胰島結(jié)構(gòu)仍完整，但在各級(jí)血管處可見明顯的凝血反應(yīng)；在移植后24h，小鼠血糖明顯高于正常，肉眼觀可見移植處有明顯機(jī)化表現(xiàn)，病理檢查可見移植物周圍有明顯的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。免疫組化檢查發(fā)現(xiàn)在移植物周圍有少量的NK細(xì)胞浸潤(rùn)。移植后3d，病理檢查可見移植物周圍可見大量的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及纖維化表現(xiàn)。從NK-kb免疫組化定量分析發(fā)現(xiàn)在移植后24h時(shí)，移植組的OD值為22

6、.33±0.58，與作為對(duì)照組相比有顯著性差異(P<0.05)。免疫組化檢查結(jié)果中的陽(yáng)性面積及OD值隨著時(shí)間的推移有逐漸增加的趨勢(shì)，這與NK細(xì)胞的增加有關(guān)，但在移植后24h有減少的表現(xiàn)。對(duì)照組：在移植后1h和24h，病理檢查未發(fā)現(xiàn)移植部位周圍有任何炎癥細(xì)胞的聚集。
　　 結(jié)論：
　　 1.膠原酶消化法可作為常規(guī)分離羅非魚胰島的分離純化方法。
　　 2.將羅非魚胰島移植到糖尿病小鼠肝臟內(nèi)，有助于降低糖尿病小鼠的血糖