炎癥致低密度脂蛋白受體表達失調在糖尿病腎病足細胞損傷中的作用研究.pdf

1、目的：現認為糖尿病腎病(diabetic nephropathy, DN)是一種慢性、炎癥性疾病，各種炎癥相關分子在DN的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，同時DN又存在不同程度的脂代謝紊亂，二者常協(xié)同致病。我們既往研究證實，炎癥可通過誘導低密度脂蛋白受體(lowdensity lipoprotein recepter，LDLr)表達失調，加速脂代謝紊亂介導的細胞、組織損傷，促進動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)的發(fā)生發(fā)展。本研

2、究旨在通過體內、體外實驗觀察炎癥介導的LDLr表達失調在DN足細胞損傷中的作用，并探討其可能的作用機制。
　　方法：將8周齡雄性db/db小鼠及對照組db/m小鼠，分別隨機分為db/db、db/db+casein組和db/m、db/m+ casein組，每組均為8只。db/m+casein組及db/db+casein組隔日給予背部皮下注射10％ casein溶液0.5ml以刺激產生慢性、持續(xù)性、微炎癥反應，建立DN微炎癥模型;db

3、/m組及db/db組隔日給予背部皮下注射蒸餾水0.5ml作對照。收集動物血漿及腎臟組織標本，檢測小鼠的血清炎癥因子水平;病理染色及電鏡評估腎臟形態(tài)改變及足細胞超微結構變化情況;免疫組化及Western Blot檢測腎臟組織炎癥因子表達情況;體外研究采用體外培養(yǎng)小鼠永生系足細胞，對分化的足細胞予不同的刺激，觀察在高糖條件下炎癥對足細胞內脂質堆積及脂代謝信號通路的影響，以及對足細胞表型改變的作用。油紅O染色、Filipin染色及化學酶促-比

4、色法觀察腎臟及足細胞內脂質積聚情況;Real-time PCR、Western Blot及免疫熒光染色法檢測足細胞特異性生物標志物nephrin、α-平滑肌肌動蛋白(α-smoothmuscle actin，α-SMA)、纖維連接蛋白（fibronectin，FN）、胞外基質Ⅰ型膠原以及LDLr信號通路相關因子表達。
　　結果：體內研究證實，炎癥刺激后，糖尿病小鼠的血肌酐(serum creatinine，Scr)及蛋白尿水平明顯

5、增加、肌酐清除率(creatinine clearance，Ccr)明顯下降，發(fā)生了顯著的系膜基質增生、腎小球基底膜(glomerular basement membrane，GBM)增厚及腎小球硬化，DN進展加速。同時觀察到，持續(xù)的微炎癥使DN小鼠發(fā)生了顯著的足突融合、脫落及表型改變。進一步研究證實，炎癥刺激增加了DN小鼠腎臟中脂質堆積，上調LDLr、SREBP-2、SCAP的蛋白表達。體外研究也證實，炎癥增加足細胞脂質堆積。進一步研

6、究顯示，炎癥刺激后足細胞胞LDLr、固醇調節(jié)元件結合蛋白-2（sterol regulatory element binding protein-2，SREBP-2）及SREBP裂解激活蛋白（SREBP cleavage-activating protein，SCAP）表達升高。激光共聚焦顯微鏡證實，炎癥能夠增加胞內SCAP/SREBP-2復合物從內質網到高爾基體的共轉位，進而上調LDLr基因轉錄，促進細胞膽固醇攝入。同時，炎癥介導的脂