miRNA let-7f在胃癌多藥耐藥中的功能與機(jī)制研究.pdf

1、【背景】
　　胃癌細(xì)胞發(fā)生多藥耐藥(multidrug resistance,MDR)是導(dǎo)致患者化療失敗的最主要原因,也是胃癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的重要原因之一。因此,闡明胃癌多藥耐藥的分子機(jī)制和探索逆轉(zhuǎn)耐藥的藥物靶點(diǎn)成為腫瘤研究領(lǐng)域的一個(gè)重要方向。miRNA是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一類(lèi)內(nèi)源性非編碼小RNA分子,其通過(guò)與靶基因mRNA的3-UTR區(qū)互補(bǔ)結(jié)合抑制其翻譯或促進(jìn)其降解,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)多種生物學(xué)過(guò)程的調(diào)節(jié)。microRNA廣泛參與真核生物的多種生

2、理病理過(guò)程,包括腫瘤的增殖、轉(zhuǎn)移和耐藥等。let-7f是miRNA let-7家族成員之一,通常在腫瘤表達(dá)中是下調(diào)的,被視為腫瘤抑制基因。我們前期研究已經(jīng)證明了,上調(diào)let-7f的表達(dá)可以抑制胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移,其可能的分子機(jī)制是通過(guò)直接抑制轉(zhuǎn)移相關(guān)基因MYH-9的表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。大量的研究表明,腫瘤的轉(zhuǎn)移和腫瘤耐藥關(guān)系密切。故我們大膽預(yù)測(cè)let-7f可能也參與胃癌多藥耐藥的調(diào)節(jié),目前尚未見(jiàn)有關(guān) let-7f參與調(diào)節(jié)胃癌多藥耐藥的研究報(bào)道,這

3、將是我們下一步的研究重點(diǎn)。
　　【目的】
　　探討let-7f在胃癌多藥耐藥中的調(diào)節(jié)作用及其潛在的分子機(jī)制。
　　【方法】
　　1.通過(guò)qRT-PCR,比較胃癌耐藥細(xì)胞系 SGC7901/ADR與其親本細(xì)胞系 SGC7901中microRNA let-7f表達(dá)水平的差異。
　　2.采用細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法,將let-7f mimic轉(zhuǎn)染入耐藥細(xì)胞SGC7901/ADR中,從而上調(diào)let-7f的水平。
　　3.

4、采用MTT法檢測(cè)SGC7901,SGC7901/ADR及轉(zhuǎn)染let-7f mimic后SGC7901/ADR對(duì)不同化療藥物的藥物敏感性。
　　4.運(yùn)用阿霉素蓄積與潴留實(shí)驗(yàn)比較耐藥細(xì)胞系SGC7901/ADR轉(zhuǎn)染let-7f mimic后的藥物泵出率。
　　5.利用流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè)轉(zhuǎn)染let-7f mimic后SGC7901/ADR的凋亡情況。
　　6.通過(guò)Western Blot檢測(cè)P-gp、Bcl-2和Cas

5、pase-3蛋白表達(dá)情況。
　　【結(jié)果】
　　1.qRT-PCR結(jié)果顯示,let-7f在SGC7901/ADR細(xì)胞中的表達(dá)較在SGC7901中的表達(dá)顯著降低（P<0.05)。
　　2.胃癌耐藥細(xì)胞系SGC7901/ADR轉(zhuǎn)染let-7f mimic后,let-7f的表達(dá)顯著上調(diào)（P<0.05)。
　　3.MTT法結(jié)果顯示,SGC7901與SGC7901/ADR兩種細(xì)胞阿霉素(ADR)的半數(shù)抑制濃度(IC50)分別

6、為(0.95±0.08)g/L和(5.40±0.28)g/L。上調(diào)let-7f的表達(dá)可以顯著增強(qiáng)耐藥細(xì)胞SGC7901/ADR對(duì)ADR和5-FU的藥物敏感性。
　　4.阿霉素蓄積與潴留實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:SGC7901/ADR細(xì)胞轉(zhuǎn)染let-7f mimic后細(xì)胞藥物泵出率顯著降低（P<0.05)。
　　5.FCM凋亡檢測(cè)結(jié)果顯示,上調(diào)let-7f的表達(dá)后,SGC7901/ADR細(xì)胞凋亡率明顯增加（P<0.05)。
　　6.

7、Western Blot結(jié)果表明,SGC7901/ADR細(xì)胞轉(zhuǎn)染let-7f mimic后cleaved Caspase-3及 P-gp表達(dá)顯著降低(p<0.05),而兩組中的Bcl-2表達(dá)水平無(wú)顯著性差異(p>0.05)。
　　【結(jié)論】
　　let-7f的表達(dá)水平在胃癌耐藥細(xì)胞SGC7901/ADR及其親本細(xì)胞SGC7901中存在顯著性差異。上調(diào)let-7f的表達(dá)可使耐藥細(xì)胞SGC7901/ADR對(duì)化療藥物的敏感性增強(qiáng)。l