miRNA let-7f在胃癌多藥耐藥中的功能與機制研究.pdf

1、【背景】
　　胃癌細胞發(fā)生多藥耐藥(multidrug resistance,MDR)是導致患者化療失敗的最主要原因,也是胃癌復發(fā)和轉(zhuǎn)移的重要原因之一。因此,闡明胃癌多藥耐藥的分子機制和探索逆轉(zhuǎn)耐藥的藥物靶點成為腫瘤研究領(lǐng)域的一個重要方向。miRNA是近年來發(fā)現(xiàn)的一類內(nèi)源性非編碼小RNA分子,其通過與靶基因mRNA的3-UTR區(qū)互補結(jié)合抑制其翻譯或促進其降解,從而實現(xiàn)對多種生物學過程的調(diào)節(jié)。microRNA廣泛參與真核生物的多種生

2、理病理過程,包括腫瘤的增殖、轉(zhuǎn)移和耐藥等。let-7f是miRNA let-7家族成員之一,通常在腫瘤表達中是下調(diào)的,被視為腫瘤抑制基因。我們前期研究已經(jīng)證明了,上調(diào)let-7f的表達可以抑制胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移,其可能的分子機制是通過直接抑制轉(zhuǎn)移相關(guān)基因MYH-9的表達實現(xiàn)的。大量的研究表明,腫瘤的轉(zhuǎn)移和腫瘤耐藥關(guān)系密切。故我們大膽預測let-7f可能也參與胃癌多藥耐藥的調(diào)節(jié),目前尚未見有關(guān) let-7f參與調(diào)節(jié)胃癌多藥耐藥的研究報道,這

3、將是我們下一步的研究重點。
　　【目的】
　　探討let-7f在胃癌多藥耐藥中的調(diào)節(jié)作用及其潛在的分子機制。
　　【方法】
　　1.通過qRT-PCR,比較胃癌耐藥細胞系 SGC7901/ADR與其親本細胞系 SGC7901中microRNA let-7f表達水平的差異。
　　2.采用細胞轉(zhuǎn)染方法,將let-7f mimic轉(zhuǎn)染入耐藥細胞SGC7901/ADR中,從而上調(diào)let-7f的水平。
　　3.

4、采用MTT法檢測SGC7901,SGC7901/ADR及轉(zhuǎn)染let-7f mimic后SGC7901/ADR對不同化療藥物的藥物敏感性。
　　4.運用阿霉素蓄積與潴留實驗比較耐藥細胞系SGC7901/ADR轉(zhuǎn)染let-7f mimic后的藥物泵出率。
　　5.利用流式細胞儀(FCM)檢測轉(zhuǎn)染let-7f mimic后SGC7901/ADR的凋亡情況。
　　6.通過Western Blot檢測P-gp、Bcl-2和Cas

5、pase-3蛋白表達情況。
　　【結(jié)果】
　　1.qRT-PCR結(jié)果顯示,let-7f在SGC7901/ADR細胞中的表達較在SGC7901中的表達顯著降低（P<0.05)。
　　2.胃癌耐藥細胞系SGC7901/ADR轉(zhuǎn)染let-7f mimic后,let-7f的表達顯著上調(diào)（P<0.05)。
　　3.MTT法結(jié)果顯示,SGC7901與SGC7901/ADR兩種細胞阿霉素(ADR)的半數(shù)抑制濃度(IC50)分別

6、為(0.95±0.08)g/L和(5.40±0.28)g/L。上調(diào)let-7f的表達可以顯著增強耐藥細胞SGC7901/ADR對ADR和5-FU的藥物敏感性。
　　4.阿霉素蓄積與潴留實驗結(jié)果表明:SGC7901/ADR細胞轉(zhuǎn)染let-7f mimic后細胞藥物泵出率顯著降低（P<0.05)。
　　5.FCM凋亡檢測結(jié)果顯示,上調(diào)let-7f的表達后,SGC7901/ADR細胞凋亡率明顯增加（P<0.05)。
　　6.

7、Western Blot結(jié)果表明,SGC7901/ADR細胞轉(zhuǎn)染let-7f mimic后cleaved Caspase-3及 P-gp表達顯著降低(p<0.05),而兩組中的Bcl-2表達水平無顯著性差異(p>0.05)。
　　【結(jié)論】
　　let-7f的表達水平在胃癌耐藥細胞SGC7901/ADR及其親本細胞SGC7901中存在顯著性差異。上調(diào)let-7f的表達可使耐藥細胞SGC7901/ADR對化療藥物的敏感性增強。l