Glypican-3和Glypican-6在巨大兒胎盤組織中表達(dá).pdf

1、巨大兒是指出生時(shí)新生兒體重≥4000克。在我國(guó)，巨大兒占出生總數(shù)的5.62％～6.69％[1]。隨著我國(guó)人民生活水平的提高，以及圍生期保健知識(shí)的普及，多數(shù)孕婦能量攝入增多，運(yùn)動(dòng)減少，使得巨大兒的發(fā)生率呈明顯的上升趨勢(shì)。盡管多數(shù)巨大兒是生理性的、健康的產(chǎn)兒、但有些出現(xiàn)病理性癥狀。妊娠合并糖尿病，孕前肥胖，遺傳因素。內(nèi)分泌失調(diào)等等都是臨床上常見(jiàn)的巨大兒誘因。但是，若要明確巨大兒發(fā)生的確切機(jī)制，依然需要從分子水平來(lái)分析。近年來(lái)，激素水平與胎兒

2、發(fā)育的關(guān)系備受科研人員的關(guān)注，已有多項(xiàng)研究表明胰島素、胰島素樣生長(zhǎng)因子、甲狀腺素、生長(zhǎng)激素、瘦素、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Fibroblast growth factor， FGF)等等都與胎兒的生長(zhǎng)發(fā)育密切相關(guān)[3 4 5 6]。而胰島素樣生長(zhǎng)因子(Insulin-like growth factor，IGF)與巨大兒發(fā)生關(guān)系最為密切，其表達(dá)水平或基因印跡狀態(tài)的變化都能．導(dǎo)致胎兒生長(zhǎng)過(guò)度，并伴有多種畸形。 Glypican蛋白屬于

3、硫酸肝素蛋白聚糖(Heparan sulfate proteoglyeans，HSPGs)家族，其通過(guò)糖基磷脂酰肌醇(GlycosyI phosphatidy IinositoI，GPI)而錨定在細(xì)胞外膜上，可結(jié)合肝素結(jié)合型蛋白如生長(zhǎng)因子、細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix，ECM)成分、細(xì)胞黏附分子和與降解通路有關(guān)的分子，調(diào)控著細(xì)胞分化、增殖等行為，在機(jī)體的生長(zhǎng)發(fā)育中起著重要，的作用。多項(xiàng)研究結(jié)果表明，glypica

4、n家族成員與生長(zhǎng)發(fā)育密切相關(guān)，而glypican-3無(wú)疑與生長(zhǎng)發(fā)育的關(guān)系最為密切。已有報(bào)道證實(shí)glypican-3與胎兒生長(zhǎng)過(guò)度綜合癥(Simpson-Golabi-Behmel syndrome，SGBS)密切相關(guān)[2]。而glypican-6作為glypican家族的最新成員，已有研究報(bào)道其在胎盤組織中具有表達(dá)[3]，但是尚未報(bào)道其與胎兒生長(zhǎng)的相關(guān)性。 目的：本研究分別從mRNA和蛋白水平對(duì)比glypican-3和glypi

5、can-6在巨大兒和正常體重新生兒胎盤組織中表達(dá)水平差異，以探討glypican-3在巨大兒發(fā)生中的作用。 方法： 1．采集24例正常體重新生兒胎盤組織，17例巨大兒胎盤組織，液氮中保存。 2．用Trizol試劑盒提取胎盤組織總RNA，用SuperScriptTM First-Strand Synthesis System試劑盒反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，Takara PCR試劑盒擴(kuò)增glypican-3，glypica

6、n-6，管家基因GAPDH作為內(nèi)參，從而在mRNA水平檢測(cè)glypican-3和glypican-6在正常體重新生兒和巨大兒胎盤組織中的表達(dá)差異。 3．RIPA方法提取胎盤組織總蛋白，靠馬斯亮藍(lán)方法蛋白定量，SDS-PAGE分離總蛋白后，半干轉(zhuǎn)印方法將蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，與glypican-3，glypican-6或GAPDH第一抗體孵育后與抗鼠第二抗體孵育，最后ECL曝光，從而在蛋白水平檢測(cè)glypican-3和glypi

7、can-6在正常體重新生兒和巨大兒胎盤組織中的表達(dá)差異。 4．以Biorad公司的Quantity One軟件分析表達(dá)條帶的灰度值，利用SPSS15.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以p<0.05作為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)果：Glypican-3無(wú)論在mRNA水平還是蛋白水平，巨大兒組都稍低于正常體重新生兒組，兩組差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而glypican-6在兩組間無(wú)顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論：Glypi