原發(fā)性膽汁性肝硬化抗線粒體抗體陽性與陰性患者間血清差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的：運(yùn)用雙向熒光差異凝膠電泳(DIGE)聯(lián)合串聯(lián)基質(zhì)輔助激光解吸飛行質(zhì)譜儀（MALDI-TOF/TOFMS）篩選原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)患者抗線粒體抗體(AMA)陽性與陰性間血清標(biāo)志物，并探討其在PBC中的臨床意義。
　　 方法：收集符合AASLD標(biāo)準(zhǔn)的PBC患者30例。其中AMA+患者20例，AMA-（間接免疫熒光法測AMA及酶聯(lián)免疫吸附法測AMA-M2均為陰性）患者10例。首先使用DIGE技術(shù)對篩選組（4對性別、年齡和

2、病理分期匹配的AMA+和AMA-PBC患者）進(jìn)行血清差異表達(dá)蛋白質(zhì)點(diǎn)分析，而后使用MALDI-TOF/TOFMS對這些蛋白質(zhì)進(jìn)行進(jìn)一步的鑒定。最后使用Westernblot法在所有樣本中對鑒定得到的血清淀粉樣蛋白P(SAP)和玻連蛋白（VN）進(jìn)行表達(dá)水平驗(yàn)證。
　　 結(jié)果：在PBC患者中分離獲得1840個蛋白質(zhì)點(diǎn)。結(jié)果經(jīng)生物信息學(xué)分析后發(fā)現(xiàn)，AMA+與AMA-PBC患者組間差異倍數(shù)＞1.5或＜-1.5以上的點(diǎn)共有28個差異點(diǎn)(P

3、＜0.05)。其中，AMA+組患者較陰性組表達(dá)上調(diào)的蛋白質(zhì)點(diǎn)共9個，而相對表達(dá)下調(diào)的蛋白質(zhì)點(diǎn)共19個。經(jīng)進(jìn)一步鑒定最終得到9個蛋白質(zhì)，SAP、血清淀粉樣蛋白A、血小板堿性蛋白、維生素D結(jié)合蛋白-3、VN、α1微球蛋白、間α球蛋白抑制因子、載脂蛋白A-Ⅳ和補(bǔ)體H相關(guān)蛋白2。Westernblot驗(yàn)證結(jié)果顯示，AMA-PBC患者其VN表達(dá)水平高于AMA陽性患者(P＜0.01)，而SAP在兩者間的表達(dá)量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.175)。