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文檔簡介
1、第一部分、建立機械通氣引起肺損傷的動物模型
目的:建立大鼠機械通氣所致肺損傷(VILI)動物模型,研究VILI病理生理改變及其可能的機制。
方法:
建立大鼠VILI動物模型分為兩部分:第一部分按照機械通氣時間分組:雄性、健康的SD大鼠40只,體重在240-290之間,隨機分成A1、A2、A3、A4四組,每組各10只。A1組為空白對照組;A2組為大潮氣量通氣1h組;A3組為大潮氣量通氣2h組; A4組為大潮氣
2、量通氣4h組。A2-A4組潮氣量(VT)均為=42ml/kg,通氣頻率為40次/分,呼氣末正壓(PEEP)設(shè)定為0。四組動物于機械通氣或自主呼吸后放血處死大鼠,取肺組織,計算肺濕/干重比(W/D),光鏡下觀測肺組織病理學(xué)改變并進行肺損傷評分。同時檢測肺組織中性粒細胞髓過氧化物酶(MPO)活性。收集支氣管肺泡灌洗液(BALF),檢測TNF-α,IL-1β和IL-6水平。檢測肺組織ICAM-1表達變化。第二部分按照機械通氣潮氣量分組:雄性、
3、健康的SD大鼠40只,體重在240-290之間,隨機分成B1、B2、B3、B4四組,每組各10只。B1組為空白對照組;B2組為小潮氣量通氣組,潮氣量(VT)為=7ml/kg,呼氣末正壓(PEEP)設(shè)定為3 cmH2O; B3組為中潮氣量通氣組,潮氣量(VT)為=20ml/kg,呼氣末正壓(PEEP)設(shè)定為0;B4組為大潮氣量通氣組,潮氣量(VT)為=42ml/kg,呼氣末正壓(PEEP)設(shè)定為0。B2、B3、B4組通氣頻率為40次/分。
4、四組動物于機械通氣或自主呼吸后放血處死大鼠,取肺組織,計算肺濕/干重比(W/D),光鏡下觀測肺組織病理學(xué)改變并進行肺損傷評分。同時檢測肺組織中性粒細胞髓過氧化物酶(MPO)活性。收集支氣管肺泡灌洗液(BALF),檢測TNF-α,IL-1β和IL-6水平。Real-time PCR及Western blot檢測肺組織ICAM-1基因及蛋白表達變化。
結(jié)果:
1.A組組織學(xué)損傷性改變:
光鏡下可見:A1組肺組織
5、無明顯的組織學(xué)損傷性改變;A2組肺組織病理改變較明顯,如:肺組織毛細血管充血,肺泡間隔增厚腫脹,肺泡腔內(nèi)有較多的炎性細胞浸潤,肺泡腔可見滲出的液體,部分肺泡腔萎縮不張;A3組肺組織病理改變加重;A4組肺組織病理改變非常顯著;和A1組相比,A2、A3、A4組ALI評分均顯著性增高(P<0.01);和A2組比較,A3、A4兩組ALI評分顯著性增高(P<0.01);和A3組比較,A4組ALI評分顯著性增高(P<0.01)。
2.A組
6、濕干重(W/D)比值、MPO活性,TNF-α、IL-1β和IL-6含量,ICAM-1的基因和蛋白表達-和A1組相比,A2、A3、A4組濕干重(W/D)比值、MPO活性,TNF-α、IL-1β和IL-6含量,ICAM-1的基因和蛋白表達均顯著性升高(P<0.01);和A2組相比,A3、A4組上述指標顯著性升高(P<0.01);和A3組相比,A4組上述指標值顯著性升高(P<0.01)。
3.B組組織學(xué)損傷性改變:
B1、
7、B2組肺組織無明顯病理改變,肺泡間隔正常,偶見少量的炎性細胞以及巨噬細胞,肺泡腔無滲出物;B3組肺組織病理改變明顯,肺泡間隔增厚,肺泡腔內(nèi)可見較多的炎性細胞,部分肺泡腔內(nèi)有血性滲出液;B4組肺組織病理改變明顯加重,肺泡間隔明顯增厚,肺泡腔中炎性細胞顯著增多,肺泡腔中可見明顯的血性滲出液。和B1、B2組比較,B3、B4兩組ALI評分顯著性增高(P<0.01);和B3組比較,B4組ALI評分顯著性增高(P<0.01)。
4.B組濕
8、干重(W/D)比值、MPO活性,TNF-α、IL-1β和IL-6含量,ICAM-1的基因和蛋白表達和B1、B2組相比,B3、B4這兩組W/D和MPO值,TNF-α、IL-1β和IL-6含量,ICAM-1的基因和蛋白表達均顯著性升高(P<0.01);和B3組相比, B4組W/D和MPO值,TNF-α、IL-1β和IL-6含量,ICAM-1的基因和蛋白表達顯著性升高(P<0.01)。
結(jié)論:大潮氣量(42 ml/kg)機械通氣對大
9、鼠產(chǎn)生了較為明顯的急性肺損傷,其損傷程度隨著通氣時間的延長而加重。
第二部分、組蛋白脫乙酰酶抑制劑對VILI的保護作用
目的:探討組蛋白脫乙酰酶抑制劑對大鼠機械通氣誘導(dǎo)的急性肺損傷的影響及可能的機制。
方法:
40只SD大鼠隨機分為四組(n=10):小潮氣量機械通氣組(LV組);大潮氣量機械通氣組(HV組);TSA治療組(HV+TSA組);SAHA治療組(HV+ SAHA組)。LV組行小潮氣量(V
10、T7ml/kg、RR40次/min),其余三組均行大潮氣量(VT42ml/kg、 RR40次/min),四組均機械通氣2h。HV+TSA,HV+ SAHA組經(jīng)腹腔注射TSA(2mg/kg),或SAHA(200 mg/kg),LV組和HV組于機械通氣前30mins經(jīng)腹腔注射等容積量的PBS。30分鐘后同第一部分給予大鼠機械通氣。四組動物于機械通氣后放血處死大鼠,取肺組織,計算肺濕/干重比(W/D),光鏡下觀測肺組織病理學(xué)改變并進行肺損傷評
11、分。同時檢測肺組織中性粒細胞髓過氧化物酶(MPO)活性。收集支氣管肺泡灌洗液(BALF),檢測TNF-α,IL-1β和IL-6水平。Real-time PCR及Western blot檢測肺組織ICAM-1基因及蛋白表達變化。
結(jié)果:
1.肺組織病理改變LV組肺組織無明顯病理改變,肺泡間隔薄,且均勻一致,偶見少量的炎性細胞以及巨噬細胞,肺泡腔無滲出物;大潮氣量組(HV組)肺組織病理改變明顯加重,肺泡間隔明顯增厚,肺泡
12、腔中炎性細胞顯著增多,肺泡腔中可見明顯的血性滲出液,部分肺泡腔萎縮不張。組蛋白脫乙酰酶抑制劑治療組(HV+ TSA組和HV+ SAHA組):與大潮氣量組比較,肺泡壓縮明顯減輕,肺泡間隔增寬程度明顯減輕,肺間質(zhì)腫脹程度明顯減輕,肺泡腔滲出明顯減輕。和HV組相比,HV+ TSA組和HV+ SAHA組ALI評分均顯著性降低(P<0.01);
2.肺組織W/D比和MPO活性,TNF-α、IL-1β和IL-6含量,ICAM-1的基因和蛋
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