淋病奈瑟菌粘附因子受體hCEACAM1轉(zhuǎn)基因小鼠模型的建立及初步應(yīng)用.pdf

1、揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文淋病奈瑟菌粘附因子受體hCEACAM1轉(zhuǎn)基因小鼠模型的建立及初步應(yīng)用姓名：王小紅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：動(dòng)物學(xué)指導(dǎo)教師：李國(guó)才20090501揚(yáng)州大學(xué)碩士論文2一hCEACAMl轉(zhuǎn)基因小鼠可成為淋病研究的良好動(dòng)物模型。本課題利用前期構(gòu)建的hCEACAMl真核表達(dá)載體，通過(guò)顯微注射法制備了hCEACAMl轉(zhuǎn)基因小鼠，并初步研究了其在淋病奈瑟菌感染動(dòng)物模型中的應(yīng)用價(jià)值。研究主要分為以下幾個(gè)部分：一、顯微注射法制備hCEA

2、CAMl轉(zhuǎn)基因小鼠在本實(shí)驗(yàn)室前期工作的基礎(chǔ)上，將表達(dá)hCEACAMl的基因構(gòu)件通過(guò)顯微注射的方法注射到C57BU6品系小鼠的受精卵中，得到hCEACAMl轉(zhuǎn)基因FO代小鼠共22只。通過(guò)PCR技術(shù)反復(fù)篩選并將PCR產(chǎn)物測(cè)序分析，得到4只(50j畢、53#、54#、59群)PCR陽(yáng)性的hCEACAMlF0代轉(zhuǎn)基因小鼠。初篩后的4只PCR陽(yáng)性小鼠分別與同品系正常小鼠交配繁殖，得到的F1代小鼠通過(guò)PCR方法反復(fù)篩選，對(duì)陽(yáng)性小鼠進(jìn)行同組間的兄妹交

3、配，得到F2、F3代轉(zhuǎn)基因小鼠。F2、F3代轉(zhuǎn)基因小鼠同樣通過(guò)PCR的方法進(jìn)行反復(fù)篩選，得到的陽(yáng)性小鼠繼續(xù)采用同組的兄妹交配方法進(jìn)行繁殖，以期能得到純合子的hCEACAMl轉(zhuǎn)基因小鼠。二、hCEACAMl多克隆抗體的制備為了進(jìn)一步分析hCEACAMl蛋白在轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)的表達(dá)情況，通過(guò)分析，找出hCEACAMl蛋白胞外區(qū)中抗原特異性最強(qiáng)的一段表位，采用PCR方法擴(kuò)增出其編碼序列，并將其連進(jìn)pGEX4T1載體中，進(jìn)行原核表達(dá)。以表達(dá)的GS

4、ThCEAC√Wl融合蛋白為抗原，應(yīng)用切膠免疫的方法制備了抗hCEACAMl的多抗血清。通過(guò)與商品化的hCEACAMl單抗比較，證實(shí)了所制備的抗hCEACAMl多抗血清能特異性識(shí)別hCEACAMl蛋白。三、hCEACAMl轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)目的基因的表達(dá)應(yīng)用制備的hCEACAMl多抗血清對(duì)4只FO代PCR陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行了體內(nèi)hCEACAMl蛋白表達(dá)情況的分析。通過(guò)Westernblot方法證實(shí)，在4只F0代PCR陽(yáng)性小鼠中，只有53#F