淋病奈瑟菌粘附因子受體hCEACAM1轉基因小鼠模型的建立及初步應用.pdf

1、揚州大學碩士學位論文淋病奈瑟菌粘附因子受體hCEACAM1轉基因小鼠模型的建立及初步應用姓名：王小紅申請學位級別：碩士專業(yè)：動物學指導教師：李國才20090501揚州大學碩士論文2一hCEACAMl轉基因小鼠可成為淋病研究的良好動物模型。本課題利用前期構建的hCEACAMl真核表達載體，通過顯微注射法制備了hCEACAMl轉基因小鼠，并初步研究了其在淋病奈瑟菌感染動物模型中的應用價值。研究主要分為以下幾個部分：一、顯微注射法制備hCEA

2、CAMl轉基因小鼠在本實驗室前期工作的基礎上，將表達hCEACAMl的基因構件通過顯微注射的方法注射到C57BU6品系小鼠的受精卵中，得到hCEACAMl轉基因FO代小鼠共22只。通過PCR技術反復篩選并將PCR產物測序分析，得到4只(50j畢、53#、54#、59群)PCR陽性的hCEACAMlF0代轉基因小鼠。初篩后的4只PCR陽性小鼠分別與同品系正常小鼠交配繁殖，得到的F1代小鼠通過PCR方法反復篩選，對陽性小鼠進行同組間的兄妹交

3、配，得到F2、F3代轉基因小鼠。F2、F3代轉基因小鼠同樣通過PCR的方法進行反復篩選，得到的陽性小鼠繼續(xù)采用同組的兄妹交配方法進行繁殖，以期能得到純合子的hCEACAMl轉基因小鼠。二、hCEACAMl多克隆抗體的制備為了進一步分析hCEACAMl蛋白在轉基因小鼠體內的表達情況，通過分析，找出hCEACAMl蛋白胞外區(qū)中抗原特異性最強的一段表位，采用PCR方法擴增出其編碼序列，并將其連進pGEX4T1載體中，進行原核表達。以表達的GS

4、ThCEAC√Wl融合蛋白為抗原，應用切膠免疫的方法制備了抗hCEACAMl的多抗血清。通過與商品化的hCEACAMl單抗比較，證實了所制備的抗hCEACAMl多抗血清能特異性識別hCEACAMl蛋白。三、hCEACAMl轉基因小鼠體內目的基因的表達應用制備的hCEACAMl多抗血清對4只FO代PCR陽性轉基因小鼠進行了體內hCEACAMl蛋白表達情況的分析。通過Westernblot方法證實，在4只F0代PCR陽性小鼠中，只有53#F