LMO2新剪切模式啟動(dòng)子的構(gòu)建及調(diào)控研究.pdf

1、目的：原癌基因LMO2(又稱為Ttg-2或Rbtn-2)隸屬于LIM蛋白家族。LMO(LIMonlyproteins)是指一些位于核內(nèi)除了特征性LIM結(jié)構(gòu)域外幾乎不含有其他成分的蛋白。LIM蛋白家族的成員中都含有一到三個(gè)特征性的52殘基的基序并且可形成特征性鋅指結(jié)構(gòu)的序列，稱為L(zhǎng)IM結(jié)構(gòu)域。目前還沒有發(fā)現(xiàn)LMO-2直接和DNA相互作用的證據(jù)，但發(fā)現(xiàn)LMO-2可以和SCL1、E2A、GATA-1和Ldb1形成一個(gè)五聚體的復(fù)合物，從而調(diào)節(jié)下

2、游基因的功能。最近本實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)一種新的LMO-2剪切模式，稱為L(zhǎng)MO-2s。此種剪切模式編碼一種N端與原有LMO-2不同的蛋白，但保留了特征性的LIM結(jié)構(gòu)域。本實(shí)驗(yàn)主要通過構(gòu)建不同長(zhǎng)度的LMO-2s啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒，試圖尋找LMO-2s的最佳啟動(dòng)序列，以及LMO-2s啟動(dòng)子的相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子和調(diào)控元件，并探詢其作用機(jī)制。 方法：從人基因組中克隆出長(zhǎng)度為2225bp可能含有LMO-2s啟動(dòng)子的序列，隨后構(gòu)建建長(zhǎng)度為2225b

3、p的pGL3-LMO2s1和1214bp的pGL3-LMO2s2啟動(dòng)子的熒光素酶報(bào)告基因(LMO-2sPromotorLuciferaseReportgene)質(zhì)粒，并使用脂質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染該質(zhì)粒到COS-7細(xì)胞中，通過檢測(cè)熒光素酶的表達(dá)水平，檢測(cè)不同質(zhì)粒LMO-2s啟動(dòng)子活性。同時(shí)驗(yàn)證本實(shí)驗(yàn)室先前構(gòu)建長(zhǎng)度為474bp的pGL3-LMO2s3質(zhì)粒的啟動(dòng)子活性。通過比較，分析可能存在的LMO-2s啟動(dòng)子的調(diào)控元件。 結(jié)果：構(gòu)建的pGL