載體介導(dǎo)的RNAi技術(shù)對(duì)HL-60細(xì)胞hTERT基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：探討由載體介導(dǎo)的靶向hTERT基因的RNAi技術(shù)對(duì)白血病HL-60細(xì)胞hTERT基因表達(dá)以及細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。 方法：用已經(jīng)構(gòu)建好的表達(dá)針對(duì)hTERT基因siRNA的質(zhì)粒載體經(jīng)轉(zhuǎn)染試劑RNAi-Mate轉(zhuǎn)染HL-60細(xì)胞；以空質(zhì)粒、轉(zhuǎn)染試劑及空白組做對(duì)照，將轉(zhuǎn)染后24h、72h、120h的細(xì)胞分別運(yùn)用RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞hTERT基因 mRNA 的表達(dá)、Western-blot檢測(cè)細(xì)胞hTERT蛋白的表達(dá)、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞

2、的凋亡情況、MTT檢測(cè)細(xì)胞的增殖活性。 結(jié)果：RT-PCR：轉(zhuǎn)染后24h、72h、120h，HL-60細(xì)胞hTERT基因mRNA相對(duì)表達(dá)水平分別為0.31±0.08、0.28±0.05、0.32±0.06，質(zhì)粒組、轉(zhuǎn)染試劑組、空白對(duì)照組分別為0.55±0.13、0.49±0.08、0.58±0.19，實(shí)驗(yàn)組mRNA表達(dá)水平低于對(duì)照組(P<0.05)；其中72h實(shí)驗(yàn)組mRNA表達(dá)水平最低；Western-blot：24h、72h、

3、120h實(shí)驗(yàn)組蛋白相對(duì)表達(dá)水平分別為0.47±0.09、0.32±0.07、0.51±0.08，質(zhì)粒組、轉(zhuǎn)染試劑組、空白對(duì)照組分別為0.75±0.11、0.76±0.15、0.73±0.14，實(shí)驗(yàn)組蛋白表達(dá)水平低于對(duì)照組(P<0.05)，72h實(shí)驗(yàn)組蛋白質(zhì)表達(dá)水平最低；流式細(xì)胞術(shù)：24h、72h、120h實(shí)驗(yàn)組、質(zhì)粒組、轉(zhuǎn)染試劑組、空白對(duì)照組凋亡率分別為(11.95±3.61)％、(14.61±2.97)％、(12.82±3.01)％、

4、(4.25±2.16)％、(5.09±1.97)％、(3.76±1.84)％。實(shí)驗(yàn)組凋亡率明顯高于其他各組(P<0.05)，72h試驗(yàn)組凋亡率最高；MTT：各組于轉(zhuǎn)染后24h、72h、120h測(cè)OD值，根據(jù)OD值做細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)及計(jì)算抑制率表明，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖明顯低于其它各組，其中72h實(shí)驗(yàn)組抑制效果最明顯。 結(jié)論：載體介導(dǎo)的靶向hTERT基因的RNAi技術(shù)能在體外抑制HL-60細(xì)胞hTERT基因的表達(dá)，并能誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡和抑制細(xì)