2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、真核翻譯起始因子eIF4G1是真核生物翻譯起始過(guò)程中連接核糖體與mRNA的腳手架蛋白,作為翻譯起始的中心蛋白招募眾多翻譯起始因子參與翻譯過(guò)程。eIF4G1參與熱應(yīng)激、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和低氧應(yīng)激等細(xì)胞應(yīng)激的調(diào)節(jié),與增殖、生物能量代謝和線(xiàn)粒體活性密切相關(guān),并且對(duì)這些過(guò)程相關(guān)因子的翻譯具有重要的調(diào)控作用。本研究采用厄爾氏平衡鹽溶液(EBSS)處理Hela細(xì)胞模擬營(yíng)養(yǎng)饑餓應(yīng)激,探索應(yīng)激狀態(tài)下eIF4G1對(duì)無(wú)義介導(dǎo)的mRNA降解(NMD)及自噬的調(diào)控作

2、用。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),細(xì)胞在營(yíng)養(yǎng)饑餓狀態(tài)下eIF4G1表達(dá)下調(diào)。此外,eIF4G1的下調(diào)能夠抑制NMD活性,從而上調(diào)NMD內(nèi)源性底物基因;同時(shí)還有助于饑餓應(yīng)激過(guò)程中自噬的激活,而激活的自噬又可以進(jìn)一步降解eIF4G1蛋白,這暗示細(xì)胞應(yīng)激過(guò)程中存在應(yīng)激增強(qiáng)機(jī)制。這一發(fā)現(xiàn)有助于深入了解細(xì)胞應(yīng)對(duì)外界環(huán)境刺激時(shí)的適應(yīng)性機(jī)制,解析細(xì)胞自噬機(jī)制與NMD機(jī)制之間的交互作用,為細(xì)胞應(yīng)激調(diào)控機(jī)制的研究提供線(xiàn)索。主要研究結(jié)果如下:
  1.EBSS誘導(dǎo)的營(yíng)養(yǎng)

3、饑餓應(yīng)激激活自噬、抑制NMD。EBSS處理Hela細(xì)胞后分別檢測(cè)自噬水平和NMD活性,結(jié)果顯示,細(xì)胞自噬被激活而NMD活性被抑制,且二者活性具有負(fù)相關(guān)性。
  2.雷帕霉素抑制Hela細(xì)胞NMD活性。使用2.5μM雷帕霉素處理細(xì)胞2h后處理組NMD內(nèi)源性底物基因TBL2、GADD45B mRNA水平較對(duì)照組均有顯著性上調(diào)(P<0.05),說(shuō)明自噬特異性激活劑雷帕霉素可以抑制NMD活性。
  3.營(yíng)養(yǎng)饑餓應(yīng)激狀態(tài)下eIF4G1

4、表達(dá)下調(diào)。eIF4G1 mRNA水平在EBSS處理2h、4h及6h都有顯著下調(diào)(2h和4h,P<0.05;6h,P<0.01),并且其蛋白水平也隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)明顯下降。
  4.干涉eIF4G1能夠抑制NMD活性。干涉eIF4G148h后,NMD內(nèi)源底物基因GADD45B mRNA水平顯著上調(diào)(P<0.05),共轉(zhuǎn)染干涉片段和NMD報(bào)告載體結(jié)果顯示干涉組NMD報(bào)告載體底物TPI mRNA水平較NC組顯著上調(diào)(P<0.01),說(shuō)

5、明干涉eIF4G1后NMD活性被抑制。
  5.干涉eIF4G1能夠激活自噬。干涉eIF4G148h后SQSTM1蛋白水平明顯下降,且LC3BⅡ/LC3BⅠ比值較NC組明顯增大,LC3-EGFP-Hela細(xì)胞EGFP綠色熒光斑點(diǎn)數(shù)量明顯增加,說(shuō)明細(xì)胞自噬水平增強(qiáng)。
  6.營(yíng)養(yǎng)饑餓應(yīng)激誘導(dǎo)的自噬降解eIF4G1蛋白。免疫熒光結(jié)果顯示EBSS誘導(dǎo)的營(yíng)養(yǎng)饑餓應(yīng)激狀態(tài)下eIF4G1蛋白與自噬體膜蛋白LC3存在共定位,表明處理后eI

6、F4G1蛋白移位于自噬體;此外,干涉自噬關(guān)鍵基因ATG7阻斷自噬后,在EBSS誘導(dǎo)的營(yíng)養(yǎng)饑餓應(yīng)激狀態(tài)下干涉組eIF4G1蛋白水平較NC組明顯上升,表明eIF4G1降解通路被阻斷。說(shuō)明營(yíng)養(yǎng)饑餓應(yīng)激誘導(dǎo)的自噬能夠降解eIF4G1。
  以上結(jié)果表明,細(xì)胞在營(yíng)養(yǎng)饑餓應(yīng)激過(guò)程中下調(diào)eIF4G1的表達(dá),一方面增強(qiáng)細(xì)胞自噬進(jìn)而增加細(xì)胞物質(zhì)能量的循環(huán)利用來(lái)提高細(xì)胞應(yīng)對(duì)環(huán)境刺激的能力;另一方面抑制NMD活性從而上調(diào)相關(guān)抗應(yīng)激因子表達(dá)以緩解細(xì)胞應(yīng)激

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