腸道Na+-膽汗酸轉(zhuǎn)運體與高脂血癥關(guān)系的研究.pdf

1、目的:本研究通過建立高脂血癥大鼠模型,以腸道Na+／膽汁酸轉(zhuǎn)運體(ileal bile acid transpotter,IBAT)為研究對象,探討腸道Na+／膽汁酸轉(zhuǎn)運體與膽汁酸代謝及高脂血癥形成的相關(guān)性,為防治高脂血癥提供新的依據(jù)和分子理論基礎(chǔ),有望為治療膽汁酸代謝紊亂及相關(guān)性疾病提供一種新的思路。
　　 方法:取Wistar雄性大鼠(體重145±8.5g)60只,隨機分為2組,每組30只:普通飲食對照組(簡稱對照組)、高脂

2、飲食實驗組(簡稱實驗組)。對照組予以普通飲食,實驗組予以高脂飲食(配方為:在基礎(chǔ)飼料中加入質(zhì)量分數(shù)為0.04膽固醇、0.1豬油、0.05蔗糖、0.005膽酸鈉、0.002丙基硫氧嘧啶),喂食90天,建立高脂血癥模型,定期取血用自動生化儀檢測膽固醇含量,4—6周監(jiān)測血膽固醇水平,觀察建模是否達到要求。兩組入選大鼠均需排除已飲用含其它類藥物飲食,高脂血癥、糖尿病、畸形等疾病存在。建模成功后,所用實驗方法分為以下兩個環(huán)節(jié):1.分別提取對照組和

3、實驗組的空腸末端、回腸末端、盲腸及結(jié)腸近端組織的RNA,應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-polymerase chain reaction:RT—PCR)技術(shù)檢測兩組模型腸組織的IBAT基因表達的強度；2.取對照組和實驗組的空腸末端、回腸末端、盲腸及結(jié)腸近端組織,石蠟切片后用免疫組化SP(streptavidin—perosidase)法檢測兩組模型腸組織的IBAT表達的強度。統(tǒng)計數(shù)據(jù)運用SPSS14.0 for windows統(tǒng)計軟件

4、包作統(tǒng)計學(xué)處理,P<0.05顯示有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果:1.電泳結(jié)果顯示:實驗中空腸末端、回腸末端、盲腸擴增產(chǎn)物都出現(xiàn)了內(nèi)參β—actin基因的220bp擴增帶和IBAT基因的355bp擴增帶,且實驗組IBAT基因擴增帶亮度明顯強于對照組。結(jié)腸近端中未見IBAT基因擴增帶。半定量結(jié)果分析:利用Quantity One軟件計算比較每一泳道中PCR產(chǎn)物條帶的光密度值,計算IBAT基因與β—actin條帶的光密度的相對比值,通過比

5、較各樣本IBAT基因的相對值,最終得出IBAT基因在空腸、回腸末端、盲腸組織中mRNA表達的相對含量。半定量結(jié)果的相對光密度值需每組每一實驗對象同等處理條件下均重復(fù)測定3次,取其最終平均值作為統(tǒng)計用數(shù)據(jù)。最后結(jié)果顯示:結(jié)腸近端在實驗組和對照組均無表達,其余在對照組IBAT基因mRNA表達較低,空腸末端(0.88427±0.041664)、回腸末端(0.92013±0.049935)、盲腸(0.86777±0.0336157),實驗組IB

6、AT基因mRNA表達較高,空腸末端(1.12817±0.050841)、回腸末端(1.14613±0.061868)、盲腸(1.14320±0.048016)表達差異性顯著,空腸近端(t=-25.6988.P<0.05)、回腸末端(t=-15.446 P<0.05)、盲腸(t=-24.007 P<0.05),均有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 2.免疫組化SP(streptavidin—perosidase)法結(jié)果顯示:在高倍顯微鏡鏡下腸道

7、組織中出現(xiàn)黃色染色顆粒為陽性細胞。每張切片隨機選取5個視野,每個視野內(nèi)觀察100個細胞,陽性細胞≥10％為陽性,否則為陰性,利用四格表的Fisher確切概率法檢驗。結(jié)果顯示:實驗組空腸末端、回腸末端、盲腸表達陽性率分別為66.3％、78.5％、55.3％；對照組空腸末端、回腸末端、盲腸表達陽性率為10.3％、12.5％、8.95％。它們之間的差異有顯著性,空腸末端IBAT基因(X2=9.631 P<0.05),回腸末端IBAT基因(X2

8、=9.873 P<0.05),盲腸IBAT基因(X2=9.209 P<0.05)。
　　 結(jié)論:1.實驗組大鼠的IBAT基因mRNA的表達較對照組明顯增加。2.實驗組和對照組大鼠的結(jié)腸近端中未見IBAT基因的表達。3.實驗組空腸末端,回腸末端及盲腸IBAT的表達明顯高于對照組,故在高脂血癥動物回腸中膽汁酸的主動轉(zhuǎn)運及空腸中膽汁酸的被動轉(zhuǎn)運過程增強,及盲腸參與膽汁酸轉(zhuǎn)運增強,進而膽汁酸攝取率增加,增加體內(nèi)膽酸池大小和肝內(nèi)膽固醇含量