代謝性谷氨酸受體對(duì)蜜蜂毒誘致的疼痛與炎癥的作用研究.pdf

1、研究背景：　　外周組織損傷所致的炎癥既伴隨有疼痛的產(chǎn)生(持續(xù)性自發(fā)痛、痛敏及觸痛等)，同時(shí)又有明顯的紅、腫、熱等反應(yīng)。我們以往的研究發(fā)現(xiàn)，大鼠后足的足底皮下注射蜜蜂毒溶液不僅能產(chǎn)生持續(xù)性自發(fā)痛反應(yīng)和機(jī)械痛敏反應(yīng)，而且在注射的后足有明顯的紅、腫等炎癥反應(yīng)[1-5]。近十余年來，大量的研究表明代謝性谷氨酸受體(mGluRS)在中樞和外周的傷害性疼痛過程中、痛敏和炎癥中都有著其重要的作用[6]，且不同的mGluRS亞型在不同部位的作用是復(fù)雜

2、的。 目的： 我們目前的實(shí)驗(yàn)主要通過觀察外周局部和鞘內(nèi)預(yù)先給予group Ⅰ mGluRS拮抗劑AIDA，group Ⅱ mGluRS激動(dòng)劑ADPC和groupⅢ mGluRs激動(dòng)劑L-AP4對(duì)皮下注射蜜蜂毒誘致的持續(xù)性自發(fā)痛反應(yīng)、機(jī)械痛敏以及炎癥反應(yīng)中的作用，用以更深入的探討代謝性谷氨酸(mGluRS)在疼痛中的作用。這些研究可能會(huì)為臨床的炎性疼痛治療提供新的理論資料和思路。 材料和方法： 應(yīng)用蜜蜂毒(

3、bee yenom，BV)做為化學(xué)致痛劑皮下注射模型來研究代謝性谷氨酸(mGluRS)在大鼠的持續(xù)自發(fā)痛反應(yīng)(persistent spontaneous nocieeption PSN)、機(jī)械痛敏及炎癥反應(yīng)中的作用。實(shí)驗(yàn)采用雄性SD大鼠，體重250～300克，外周局部注射實(shí)驗(yàn)分別預(yù)先10分鐘給予大鼠一側(cè)后肢足底皮下注射不同劑量的group ⅠmGluRS拮抗劑AIDA，group Ⅱ mGluRS激動(dòng)劑ADPC和groupⅢ mGlu

4、RS激動(dòng)劑L-AP4，其后注射側(cè)后肢足底皮下注射蜜蜂毒(0.2mg/50μl)；而對(duì)照組注射AIDA、ADPC和L-AP4的溶媒(50μl/只，溶媒為30％的二甲基亞砜和70％的PBS)；同時(shí)為了排除藥物的全身效應(yīng)，分別提前10分鐘在蜜蜂毒注射的對(duì)側(cè)皮下注射相應(yīng)的較高劑量的AIDA(25μmol/50μl)，ADPC(50nmol/50μl)，L-AP4(20μmol/50 μl)。鞘內(nèi)注射實(shí)驗(yàn)分別預(yù)先10分鐘在術(shù)后大鼠的PE管中注入高

5、劑量的AIDA(25μmol/20 μl)，ADPC(50nmol/20 μl)，L-AP4(20μ mol/20μl)，而對(duì)照組注射AIDA、ADPC、L-AP4的溶媒(20μl/只，DMSO：PBS=3：7)。觀察大鼠在蜜蜂毒注射后1個(gè)小時(shí)內(nèi)的自發(fā)痛行為(縮足反射)，每5分鐘為一個(gè)計(jì)時(shí)點(diǎn)。蜜蜂毒注射前及注射后2小時(shí)用。von-Frey機(jī)械刺激器纖維檢測(cè)注射側(cè)鼠爪的機(jī)械刺激反應(yīng)閾值(paw withdrawal mechanical

6、threshold，PWMT)以及應(yīng)用YLS-7A足趾容積測(cè)量?jī)x測(cè)量蜜蜂毒注射前及注射后4小時(shí)注射側(cè)鼠爪的體積。 結(jié)果： (1)對(duì)自發(fā)痛的影響：與對(duì)照組相比，同側(cè)低劑量AIDA處理組在早期(0-25 min)無明顯的作用，但在后期(26-60 min)對(duì)蜜蜂毒誘發(fā)的自發(fā)縮足有明顯的抑制作用；中劑量和高劑量的AIDA對(duì)自發(fā)縮足反射均有明顯的抑制作用；且不同劑量的AIDA有明顯的劑量依賴。同側(cè)ADPC和L-AP4處理組，各種

7、劑量的ADPC、L-AP4均對(duì)蜜蜂毒誘致的自發(fā)縮足有明顯的抑制作用，但均無明顯的劑量依賴。對(duì)側(cè)AIDA、ADPC和L-AP4處理組對(duì)蜜蜂毒誘發(fā)的自發(fā)縮足反射無任何影響，排除了藥物的全身反應(yīng)。與對(duì)照組相比，在蜜蜂毒注射前10分鐘鞘內(nèi)注入AIDA、ADPC均產(chǎn)生明顯的抑制自發(fā)縮足的作用；但提前10分鐘注射L-AP4與對(duì)照組相比無抑制蜜蜂毒誘致的持續(xù)性自發(fā)痛(PSN)的作用。 (2)對(duì)痛敏的影響：同側(cè)。或?qū)?cè)AIDA、L-AP4處理組

8、，對(duì)蜜蜂毒誘致的機(jī)械刺激反應(yīng)閾值的下降均無顯著的影響；同側(cè)ADPC處理組，低劑量的ADPC對(duì)機(jī)械刺激反應(yīng)閾值(PWMT)無影響，中劑量和高劑量的ADPC增加了其機(jī)械刺激閾值，并且有劑量依賴性，對(duì)側(cè)ADPC處理組對(duì)蜜蜂毒誘致的機(jī)械刺激閾值的下降無影響。預(yù)先鞘內(nèi)注射AIDA、ADPC和L—AP4對(duì)蜜蜂毒誘致的機(jī)械刺激閾值下降均無影響。 (3)對(duì)炎癥的影響：同側(cè)或?qū)?cè)皮下注射AIDA、ADPC、L-AP4處理組，均對(duì)由蜜蜂毒誘致的鼠爪

9、體積增加無明顯影響。鞘內(nèi)分別注射AIDA、ADPC和L-AP4與對(duì)照組相比也無顯著性的差異，即對(duì)由蜜蜂毒注射引起的鼠爪體積增加也無明顯影響。 結(jié)論： (1)外周group Ⅰ mGluRS、group Ⅱ mGluRS和group Ⅲ mGluRS可能影響了蜜蜂毒誘致的持續(xù)性自發(fā)痛，中樞的group Ⅰ mGluRS、group Ⅱ mGluRS也參與了蜜蜂毒誘致的持續(xù)性自發(fā)痛行為，但中樞的group Ⅲ mGluRS不