抑黑方和促黑方調(diào)節(jié)人黑色素瘤A375細(xì)胞黑色素合成及酪氨酸酶活性的研究.pdf

1、　　目的：從臨床治療黃褐斑和白癜風(fēng)常用中藥中篩選調(diào)節(jié)黑色素合成的有效中藥以研制抑制和促進黑色素合成的中醫(yī)方劑，觀察該方對黑色素合成及酪氨酸酶活性的作用，探討抑黑方和促黑方治療色素障礙性皮膚病的作用機制和中醫(yī)病機，為中醫(yī)治療色素障礙性皮膚病提供有效方劑。
　　方法：從近 30 年中國期刊全文數(shù)據(jù)庫檢索治療黃褐斑和白癜風(fēng)總結(jié)出常用270味中藥作為候選中藥，用95%乙醇室溫提取1周制備中藥醇提物；以100μg/ml藥物濃度處理人黑色素

2、瘤A375細(xì)胞48小時后，用MTT法測定細(xì)胞生長活性，用NaoH裂解法測定黑色素含量，計算藥物抑制或促進黑色素合成率，選出黑色素合成抑制率或促進率高的藥物，分別檢測藥物作用量效關(guān)系；運用正交試驗設(shè)計優(yōu)選出最佳的藥物組合組成抑制或促進黑色素合成方劑，分別命名為抑黑方和促黑方。檢測抑黑方和促黑方對人黑色素瘤A375細(xì)胞黑色素合成的量效和時效關(guān)系，用多巴氧化法檢測對人黑色素瘤A375細(xì)胞酪氨酸酶活性的量效和時效關(guān)系，在倒置顯微鏡下觀察黑色素瘤

3、A375細(xì)胞形態(tài)變化并拍照。
　　結(jié)果： 1.調(diào)節(jié)人黑色素瘤A375細(xì)胞黑色素合成中藥的篩選和方劑研制。分別用 270 味中藥醇提物以 100μg/ml 濃度處理人黑色素瘤 A375 細(xì)胞 48h 后，對加藥組與對照組的黑色素含量和細(xì)胞數(shù)光密度值( OD)進行單因素方差分析，選擇對黑色素合成有明顯差異而對細(xì)胞數(shù)無明顯差異的藥物，結(jié)果確定抑制黑色素藥物 6味：荔枝核、香附、豬苓、薏苡仁、枸杞子和龜板；促進黑色素藥物 6 味：木香、

4、川楝子、巴戟天、杜仲、蟬蛻和白芷。經(jīng)過正交試驗分析優(yōu)選出由分別上述兩組中藥組成的抑制黑色素合成方和促進進黑色素合成方，分別命名為抑黑方和促黑方。
　　2. 抑黑方和促黑方對人黑色素瘤 A375細(xì)胞黑色素合成作用呈量效和時效關(guān)系。當(dāng)抑黑方和促黑方藥物濃度為6.25~100μg/ml時， 隨著藥物濃度增加， 對人黑色素瘤 A375細(xì)胞黑色素合成抑制率和促進率都增強，藥物濃度至 100μg/ml時達到最高峰值；當(dāng)濃度為 200~800

5、μg/ml 時， 隨著藥物濃度增高，黑素抑制率和促進率都呈下降趨勢，至800μg/ml時都降至最低峰值。
　　3. 抑黑方和促黑方對人黑色素瘤 A375細(xì)胞酪氨酸酶活性作用呈量效和時效關(guān)系。抑黑方和促黑方濃度為6.25~100μg/ml時，隨著藥物濃度增加，對人黑色素瘤 A375細(xì)胞酪氨酸酶活性抑制率和促進率都增加，藥物濃度為 100μg/ml達最高峰值；當(dāng)濃度為 200~800μg/ml 時，隨著藥物濃度增加，對酪氨酸酶活性抑

6、制 率和促進率都呈下降趨勢，至800μg/ml時降至最低峰值。
　　4. 正常人黑色素瘤A375細(xì)胞鏡下呈梭形，當(dāng)用100μg/ml藥物濃度處理細(xì)胞48小時后，抑黑方與對照組比較，細(xì)胞體積減小，細(xì)胞樹突變少，細(xì)胞內(nèi)黑素顆粒明顯減少；促黑方與對照組比較，細(xì)胞體積增大，細(xì)胞樹突增多，細(xì)胞呈梭形，三級或多級，細(xì)胞內(nèi)黑素顆粒顯著增加。
　　結(jié)論：
　　1. 本研究為治療色素障礙性皮膚病提供了有效方劑抑黑方和促黑方。