紅色諾卡氏菌發(fā)酵條件優(yōu)化及N-CWS提取工藝的改進(jìn)研究.pdf

1、目前,腫瘤及許多疾病已成為威脅人類健康的重大隱患。有研究表明,紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架中的提取物具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫的功能,能增強(qiáng)T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞的活性,對(duì)于人體淋巴細(xì)胞則具有致有絲分裂原活性,并能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生干擾素。通過(guò)多年的實(shí)驗(yàn)及臨床研究證明它具有抗腫瘤作用,并能抗細(xì)菌、病毒的感染。在臨床治療腫瘤及婦科相關(guān)疾病上有很好的療效。如今關(guān)于N-CWS的研究大多著重于臨床上針對(duì)其對(duì)癌癥、炎癥的抑制作用進(jìn)行嘗試,而關(guān)于紅色諾卡氏菌的培養(yǎng)條

2、件優(yōu)化的研究還停留在較低水平。
　　 本研究通過(guò)對(duì)培養(yǎng)基中的碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽離子、培養(yǎng)基pH值、搖床速度、培養(yǎng)溫度、溶氧和接種量等因素進(jìn)行了優(yōu)化,通過(guò)一系列實(shí)驗(yàn)得出較為適合紅色諾卡氏菌生長(zhǎng)繁殖的培養(yǎng)方式,當(dāng)培養(yǎng)條件為葡萄糖/酵母膏培養(yǎng)基,pH7-8,26℃搖床培養(yǎng)(320 r/min),50 mL液體培養(yǎng)基接種量在1.5％(0.75 mL)時(shí)最為適合。
　　 當(dāng)前,對(duì)于紅色諾卡氏菌的細(xì)胞壁破碎有不同的方法,本文比較了超

3、聲波法、自溶法和堿法對(duì)Nocardia的破碎情況.試驗(yàn)結(jié)果表明,這三種細(xì)胞壁破碎方法中超聲波法和堿法周期短,效果好;而自溶法周期長(zhǎng)效率低,效果不佳。在超聲波破碎法中全程破碎時(shí)間和輸出功率是超聲波法破碎的主要影響因素,采用短時(shí)多次的破碎方式和質(zhì)量濃度為1.5 g/L的細(xì)胞懸浮液有利于細(xì)胞的破碎。同時(shí)利用正交法對(duì)超聲波破壁的條件進(jìn)行研究,得出在一定菌濃下,用于超聲波破壁的最佳設(shè)置為超聲波時(shí)間15s,間隔時(shí)間15s,循環(huán)數(shù)40次,功率500W

4、。在自溶法破碎中,自溶時(shí)間是主要影響因素,NaCl質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1％、溫度為50℃利于細(xì)胞的自溶,經(jīng)過(guò)較長(zhǎng)時(shí)間的處理時(shí)間,10％的NaCl及DH9的液體環(huán)境利于自溶。堿液(KOH溶液)濃度為5.5％時(shí)最有利于放線菌細(xì)胞破壁,破壁時(shí)間為30分鐘。
　　 傳統(tǒng)的紅色諾卡氏菌細(xì)胞壁骨架(N-CWS)成品檢測(cè)中存在某些不足,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)以下三方面的改進(jìn)來(lái)提升檢測(cè)水平。用薄層層析法來(lái)代替紙層析法并研究影響層析的一些因素,尋得最佳的層析分離效果,