豆天蛾核型多角體病毒感染性的研究及其基因組序列的初步解析.pdf

1、桿狀病毒是一類主要以鱗翅目昆蟲為宿主的，有囊膜的雙鏈DNA病毒，是農(nóng)林重要害蟲的自然控制因子，由于其可作為生物殺蟲劑和外源基因表達載體而日益受到重視。豆天蛾(ClanisbilineatatiainglauicaMell，又稱豆青蟲)是以幼蟲咬食豆類植物、刺槐、洋槐等的葉片為生的昆蟲。近年來該蟲的為害面積不斷擴大，在生產(chǎn)上已引起重視。在目前全球共發(fā)現(xiàn)的500余種桿狀病毒中，尚未發(fā)現(xiàn)有桿狀病毒感染豆天蛾的報道。本實驗室從浙江湖州市的桑田邊

2、植物上發(fā)現(xiàn)了具備核多角體病毒感染特征的豆天蛾幼蟲尸體，從中分離到一種新型的病毒：豆天蛾核型多角體病毒ClanisbilineataNuclearPolyhedrosisVirus(CbNPV)。本論文分離純化了豆天蛾核型多角體病毒，對其感染性進行了研究，并對該病毒的基因組序列進行了初步解析。這將有助于全面地了解該病毒的基因組特征，提供更多病毒與宿主間相互作用的分子機理的推斷和論證，為將其改造成一種宿主范圍更廣的生物殺蟲劑奠定基礎。本研究

3、的主要結(jié)論如下： 1、分離純化了豆天蛾核型多角體病毒，經(jīng)電鏡觀察，確定該病毒為多粒包埋型多角體病毒。 2、以添食的方法感染豆天蛾、葡萄天蛾、芋雙線天蛾、紅天蛾等的幼蟲，觀察食下后的病理變化。經(jīng)鏡檢，在病蟲尸體中均可觀察到多角體。進一步提取NPVDNA進行酶切圖譜鑒定。結(jié)果表明豆天蛾、葡萄天蛾、芋雙線天蛾、紅天蛾均為豆天蛾桿狀病毒的天然宿主。 3、豆天蛾核型多角體病毒基因組DNA轉(zhuǎn)染BmN，Spli，Sf9和Tn5

4、等四種昆蟲細胞系，Spli細胞有感染癥狀的出現(xiàn)，但并未出現(xiàn)多角體，BmN、Sf9和Tn5細胞則沒有明顯的感染性。 4、基因組全序列分析表明豆天蛾核型多角體病毒基因組全長135,454bp，共有129個開放讀碼框大于或等于150bp，堿基組成中，G+C含量為37.7％。以多角體蛋白和DNA聚合酶蛋白氨基酸序列進行了分子系統(tǒng)進化研究，構(gòu)建的系統(tǒng)樹顯示豆天蛾核型多角體病毒屬于Ⅱ群NPV。并對豆天蛾核型多角體病毒的gp41、ubiqui