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文檔簡介
1、桿狀病毒是有囊膜的雙鏈閉合環(huán)狀DNA大形病毒,其基因組大小為80-180kb,主要以鱗翅目昆蟲為宿主,迄今僅從節(jié)肢動物(絕大部分從昆蟲)中分離出來,而且都具有高度的宿主特異性。蓖麻蠶(Philosamia cynthia ricini)和柞蠶(Antheraea pernyi)都是具有較高經(jīng)濟價值的泌絲昆蟲,都容易被核型多角體病毒感染。柞蠶核型多角體病毒(Antheraea pernyi nucleopolyhedrovirus,Anp
2、eNPV)的基因組序列已經(jīng)完成,而對蓖麻蠶核型多角體病毒(Philosamia cynthia ricini nucleopolyhedrovirus,PcrNPV)的基因組序列則知之甚少。以前的研究發(fā)現(xiàn)這兩種病毒在感染性上有一定聯(lián)系,為了弄清它們之間的關(guān)系,本論文分離純化了蓖麻蠶和柞蠶核型多角體病毒,對其感染性進行了研究,并對這兩種病毒的解旋酶(helicase)基因進行了分析。從而了解這兩種病毒的相互感染特性,查明昆蟲病毒的宿主特異
3、性或宿主域,對進一步了解桿狀病毒宿主域決定機制打下基礎(chǔ)。本研究的主要結(jié)論如下: 1、分離純化了蓖麻蠶和柞蠶核型多角體病毒,經(jīng)電鏡觀察,兩種多角體大多呈大小均一的三角體,大小為1-3 μm。 2、用經(jīng)口感染的方法觀察柞蠶和蓖麻蠶幼蟲食下后的變化。經(jīng)鏡檢發(fā)現(xiàn)AnpeNPV能感染柞蠶和蓖麻蠶幼蟲,感染率分別為78%和57%。純化病蟲尸體中收集的多角體,提取DNA,進行Hind Ⅲ、SalⅠ、XhoⅠ和PstⅠ酶切圖譜鑒定,結(jié)果
4、發(fā)現(xiàn)酶切圖譜與添毒多角體DNA的酶切圖譜一致;而PcrNPV只能感染蓖麻蠶幼蟲,感染率為79%,對柞蠶幾乎沒有感染力。 3、PcrNPV與AnpeNPV基因組DNA分別轉(zhuǎn)染BmN和Tn5昆蟲細(xì)胞系,細(xì)胞都沒有明顯的感染癥狀。 4、進一步構(gòu)建了PcrNPV DNA PstⅠ酶切片段文庫,挑取陽性克隆測序,測得的序列與AnpeNPV基因組序列的同源性均在95%以上,所以PcrNPV與AnpeNPV的同源性非常高。 5、hel
5、icase基因氨基酸同源性構(gòu)建的分子進化樹狀圖表明:PcrNPV與AnpeNPV的helicase基因進化關(guān)系較近,而與AcMNPV及BmNPV等的進化關(guān)系較遠(yuǎn)。 6、分析了PcrNPV和AnpeNPV的helicase基因,結(jié)果發(fā)現(xiàn)PcrNPVhelicase基因與AnpeNPV的helicase基因在桿狀病毒的宿主域決定區(qū)、核定位信號區(qū)和C端7個基序上,氨基酸序列完全相同,僅在靠近DNA結(jié)合區(qū)螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋結(jié)構(gòu)處(974位
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