復(fù)方氟苯尼考注射液在豬體內(nèi)的殘留消除研究.pdf

1、復(fù)方氟苯尼考注射液是一種由氟苯尼考和氟尼辛葡甲胺組成的新型復(fù)方制劑，臨床主要用于治療豬胸膜肺炎放線菌所致的呼吸道感染。本研究旨在建立檢測(cè)豬多組織（肝臟、肌肉、腎臟和皮脂）中氟苯尼考?xì)埩魳?biāo)示物的HPLC-MS/MS法和氟尼辛殘留物的HPLC法，研究了復(fù)方氟苯尼考注射液在豬組織中的殘留消除規(guī)律，進(jìn)而為制定該藥在豬體內(nèi)的休藥期提供依據(jù)。
　　1、豬組織中氟苯尼考標(biāo)示物的HPLC-MS/MS檢測(cè)
　　豬各可食性組織（肝臟、腎臟、肌肉

2、和皮脂）使用氨水和乙酸乙酯(v/v3∶97)混合液提取，氮吹后的水復(fù)溶液使用乙腈飽和正己烷脫脂，以乙腈和0.1％甲酸水(0-1.5min20％乙腈，4-7min80％乙腈，8-15min100％乙腈，16-25min20％乙腈)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。質(zhì)譜采用電噴霧離子源(ESI)，正離子和負(fù)離子切換，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式。結(jié)果表明，氟苯尼考和氟苯尼考胺在10～2000ng/ml濃度范圍內(nèi)，濃度與響應(yīng)值之間線性良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.

3、99，方法的檢測(cè)限為10μg/kg，定量限為20μg/kg。在20～4000μg/kg的添加濃度范圍內(nèi)，平均添加回收率在79.26％～113.26％之間，批內(nèi)批間變異系數(shù)均小于10％。本實(shí)驗(yàn)建立的方法能滿足豬組織中氟苯尼考?xì)埩袅康臋z測(cè)要求。
　　2、豬組織中氟尼辛殘留量的HPLC檢測(cè)
　　豬各可食性組織（肝臟、腎臟、肌肉和皮脂）使用1％ TCA乙腈混合液提取，兩次的合并提取液使用乙腈飽和正己烷脫脂，PCX陽離子交換柱凈化。流

4、動(dòng)相為甲醇-0.05mol/L磷酸三乙胺溶液，紫外波長(zhǎng)為333nm。結(jié)果表明，氟尼辛在0.02～5μg/ml濃度范圍內(nèi)，濃度與峰面積之間表現(xiàn)出很好的線性關(guān)系(R2=0.9994)。氟尼辛在腎臟和肝臟的檢出限與定量限均分別為15、30μg/kg，皮脂的檢測(cè)限與定量限分別為6、10μg/kg，肌肉的檢出限和定量限分別為10、25μg/kg。氟尼辛在腎臟、肝臟添加濃度為30、200和1000μg/kg時(shí)，平均添加回收率分別在74.78％～84

5、.67％、83.49％～86.16％之間。在皮脂添加濃度為10、200和1000μg/kg時(shí)，平均添加回收率在83.88％～89.26％之間，在肌肉添加濃度為25、200和1000μg/kg時(shí)，平均添加回收率在72.10％～89.18％之間，批內(nèi)批間變異系數(shù)均小于10％。本實(shí)驗(yàn)建立的方法能滿足豬組織中氟尼辛殘留量的檢測(cè)要求。
　　3、復(fù)方氟苯尼考注射液在豬體內(nèi)殘留消除研究
　　25頭商品雜交豬，按40mg/kg·bw（以氟苯

6、尼考計(jì)）的劑量肌注復(fù)方氟苯尼考注射液，分別于停藥后第1d、6d、11d、16d和21 d時(shí)各屠宰5頭豬，采集豬肌肉、肝臟、腎臟、皮脂和注射部位肌肉等可食性組織進(jìn)行氟苯尼考和氟尼辛標(biāo)示殘留物的殘留量檢測(cè)。測(cè)定結(jié)果顯示，除注射部位外，停藥后第1d氟苯尼考在豬的各可食性組織中殘留量以腎臟最高，其次是肝臟和皮脂，肌肉最低。停藥后第1d氟苯尼考胺在豬的各可食性組織中殘留量以肝臟最高，其次是腎臟，肌肉和皮脂最低;停藥后第1d氟尼辛在豬的各可食性組織

7、中殘留量以腎臟和皮脂最高，其次是肝臟，肌肉最低。
　　研究表明，停藥后氟苯尼考在肌肉中消除最快，其次是腎臟和皮脂，肝臟最慢，表明肝臟是氟苯尼考的殘留靶器官。采用WT1.4軟件估算氟苯尼考在皮脂、肝臟和腎臟的休藥期，得出氟苯尼考在皮脂、肝臟和腎臟休藥期分別為7.21d、4.62d和10.02d，采用實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)法估算氟苯尼考在肌肉中的休藥期，得出氟苯尼考在肌肉中的休藥期為11d。停藥后氟尼辛在肌肉中消除最快，至停藥后第11d所有豬可食性