APR-246-PRIMA-1MET對人結(jié)膜鱗狀上皮化生的影響及相關(guān)機(jī)制.pdf

1、目的：探討APR-246/PRIMA-1 MET對人結(jié)膜鱗狀上皮化生(squamousmetaplasia，SM)的影響及研究其相關(guān)作用機(jī)制。
　　方法：結(jié)膜組織以不同濃度的APR-246/PRIMA-1 MET(0μM，3μM，15μM)空氣暴露培養(yǎng)不同時間（4，8，12天）。HE染色檢測結(jié)膜上皮的形態(tài)改變;免疫組織化學(xué)染色檢測結(jié)膜上皮特異性功能相關(guān)基因的表達(dá);實(shí)體顯微鏡觀察測算結(jié)膜周邊新生上皮細(xì)胞的數(shù)量和速度;免疫熒光染色和實(shí)

2、時熒光PCR檢測上皮增殖及分化狀態(tài)和Wnt信號通路相關(guān)基因的表達(dá)。
　　結(jié)果：HE染色實(shí)驗(yàn)顯示15μM APR-246/PRIMA-1MET處理可顯著抑制空氣暴露條件下結(jié)膜上皮復(fù)層化及上皮細(xì)胞層數(shù)增加。實(shí)體顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)3μM和15μM APR-246/PRIMA-1MET均可抑制結(jié)膜上皮周邊細(xì)胞的生長數(shù)量及遷移速度。免疫組織化學(xué)染色和實(shí)時熒光PCR檢測表明，空氣暴露培養(yǎng)可上調(diào)結(jié)膜上皮增殖相關(guān)基因p63并誘導(dǎo)皮膚特異性角蛋白K10

3、的表達(dá)，降低黏蛋白MUC5AC和眼部關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Pax6的表達(dá)，而APR-246/PRIMA-1 MET在不同程度上對上述蛋白的異常表達(dá)有所糾正。胬肉組織中，運(yùn)用APR-246培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)胬肉上皮細(xì)胞層數(shù)減少，皮膚特異性角蛋白K10及增殖相關(guān)基因p63表達(dá)量下降，上皮形態(tài)趨向正常結(jié)膜表型。免疫熒光染色還發(fā)現(xiàn)APR-246/PRIMA-1MET可顯著提降低β-catenin入核比率，實(shí)時熒光PCR檢測Wnt/β-catenin信號通路下游