Hedgehog在牽張力促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖中的作用研究.pdf

1、研究目的：Hedgehog(Hh)家族中的Ihh和Shh是骨生長(zhǎng)發(fā)育的重要調(diào)節(jié)因子。本研究的目的是觀察牽張力下Hh的表達(dá)及其對(duì)成骨細(xì)胞增殖的影響，從而明確機(jī)械應(yīng)力對(duì)成骨細(xì)胞調(diào)控的機(jī)制。 材料與方法：體外分離和培養(yǎng)新生大鼠顱頂骨成骨細(xì)胞,應(yīng)用Flexcell 4000TM加力系統(tǒng)施加3％和6％的兩種張應(yīng)變。用Hedgehog N端重組蛋白（N-Shh）、Hedgehog 通道抑制劑Cyclopamine(cy)和機(jī)械通道抑制劑三氯

2、化釓（GdCl3）對(duì)成骨細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)。分別采用細(xì)胞計(jì)數(shù)、MTT比色法和流式細(xì)胞儀檢測(cè)成骨細(xì)胞的增殖；利用堿性磷酸酶(ALP)定性和定量分析和茜素紅染色（ARS）檢測(cè)成骨細(xì)胞分化及基質(zhì)鈣化；定量PCR檢測(cè)Hedgehog 通路相關(guān)基因Ihh、Shh、Ptch、Smo和β-Catenin的表達(dá)。采用SAS8.0軟件包對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果：在成骨細(xì)胞體外培養(yǎng)過程中，Shh的表達(dá)逐漸減弱，而Ihh的表達(dá)逐漸增強(qiáng)。外源性N-Shh蛋

3、白使成骨細(xì)胞數(shù)目增加21.2％(P＜0.05)，S期細(xì)胞比例增加37.4％(P<0.05)，并且促進(jìn)ALP的活性以及Ptch和Smo的表達(dá)；cy則抑制成骨細(xì)胞的增殖和分化。牽張力促進(jìn)了成骨細(xì)胞的增殖，以6％張應(yīng)變更顯著；加力4h、12h和24h后，Shh基因表達(dá)沒有明顯變化，而Ihh的表達(dá)分別增加了20％、60％和50％(P＜0.05)，其下游基因Ptch和Smo的表達(dá)變化與Ihh類似，β-Catenin 在4h和12h后表達(dá)明顯增加，