在線SPE-HPLC-DAD系統(tǒng)和在線SPE-HPLC-MS-MS系統(tǒng)在核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑藥代動力學研究中的應用.pdf

1、當前，隨著臨床前藥代動力學研究的不斷發(fā)展，對分析方法的要求也越來越高，并且由于生物樣本的復雜性，使得體內(nèi)藥物分析方法的建立困難。因此，迫切需要建立靈敏度更高、準確性更好、速度更快、效率更高的科學分析方法對生物樣品中的目標化學成分進行定性定量研究。在線固相萃取這一先進的樣品前處理技術(shù)的出現(xiàn)，很好的滿足了以上分析需求。本文依據(jù)此技術(shù)建立了全自動在線SPE-HPLC-DAD系統(tǒng)和在線SPE-HPLC-MS/MS系統(tǒng)并分別應用于拉米夫定和司他夫

2、定的藥代動力學研究中，從而實現(xiàn)了省時、省力、高通量。
　　 基于以上所述，本文研究內(nèi)容包括以下幾點:
　　 (1)建立全自動在線SPE-HPLC-DAD方法測定小鼠血漿中拉米夫定的血藥濃度，研究拉米夫定在小鼠體內(nèi)的藥動學特征。色譜條件:LiChrospher(R)RP-18ADS在線SPE柱(25 mm×4 mm，25μm)，洗脫劑為5 mmol·L1KH2PO4緩沖液(pH6.5)，Venusil MP C18分析柱（

3、150 mm×4.6 mm，5μm），洗脫劑采用乙腈-5mmol·L-1 KH2P04緩沖液(pH6.5)(8∶92，V/V)，流速1 ml/min，等度洗脫;檢測波長272 nm。單個樣品分析時間為10 min。拉米夫定線性范圍為100-50000ng·mL-1，最低定量限為100 ng·mL-1，絕對回收率為91.91-100.78％，日內(nèi)、日間精密度RSD為4.23-9.57％，短期、凍融及長期穩(wěn)定性RSD均小于5.08％。

4、>　　 (2)建立司他夫定的全自動在線SPE-HPLC-DAD測定方法。色譜條件:LiChrospher(R)RP-18 ADS在線SPE柱(25 mm×4 mm，25μm)，洗脫劑為5mmol·L-1KH2PO4緩沖液(pH6.5)，VenusilMP C18分析柱(150mm×4.6mm，5μm)，洗脫劑采用乙腈-5 mmol·L-1 KH2PO4緩沖液(pH6.5)(5∶95，V/V)，流速1 ml/min，等度洗脫;檢測波長2

5、67nm，單個樣品分析時間為18 min。司他夫定線性范圍為200-20000 ng·mL-1，最低定量限為200 ng·mL-1，絕對回收率為98.58-100.76％，日內(nèi)、日間精密度RSD為2.06-2.70％，短期、凍融及長期穩(wěn)定性RSD均小于4.08％。
　　 (3)建立司他夫定的全自動在線SPE-HPLC-MS/MS測定方法，研究司他夫定在小鼠體內(nèi)的藥動學特征。并采用響應面法(RSM)進行優(yōu)化，確定該方法的最優(yōu)條件:

6、分析柱洗脫劑采用乙腈-10 mmol·L-1醋酸銨緩沖液(pH7)(20∶80，V/V)，流速1 ml/min，等度洗脫;SPE柱洗脫劑為10 mmol·L-1醋酸銨緩沖液(pH7);基質(zhì)洗脫時間(t(M))1 min，反向洗脫時間(t(T))1 min。掃描目標化合物司他夫定離子對為m/z225.2→m/z127.1，掃描時間為5 min。司他夫定線性范圍為20-10000 ng·mL-1，最低定量限為20.0 ng·mL-1，絕對回