E-cadherin在激素非依賴性前列腺癌中的影響及意義.pdf

1、目的:
　　 通過實(shí)驗(yàn)探討E_cadherin在激素非依賴性前列腺癌上的表達(dá)及基因啟動子CpG島甲基化情況，并探討甲基化抑制劑5-氮雜-2＇-脫氧胞苷對激素非依賴性前列腺痛細(xì)胞的影響及意義。
　　 方法:
　　 從國內(nèi)大型細(xì)胞庫購買人前列腺癌細(xì)胞株和正常人前列腺上皮細(xì)胞株，進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)分3組：(1)正常對照組：正常人前列腺上皮細(xì)胞株RWPE-1;(2)對照組：激素依賴性前列腺癌細(xì)胞株LnCaP;(3)實(shí)驗(yàn)組

2、：激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3。用MSP(甲基化特異性PCR)方法檢測5-氮雜-2＇-脫氧胞苷作用前后三種細(xì)胞的E_cadherin基因啟動子CpG島的甲基化情況；用RT-PCR方法檢測5-氮雜-2＇-脫氧胞苷作用前后這三種細(xì)胞的E_cadherin mRNA轉(zhuǎn)錄情況；再用Westernblot技術(shù)檢測相應(yīng)的E_cadherin蛋白水平上的表達(dá)。比較各組細(xì)胞E_cadherin表達(dá)的差異，以及在蛋白質(zhì)及mRNA水平上的相關(guān)性。最后

3、用Transwell小室檢測5-氮雜-2＇-脫氧胞苷作用后癌細(xì)胞侵襲性的改變。并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果:
　　 1．MSP結(jié)果顯示：正常人前列腺上皮細(xì)胞RWPE-1呈甲基化陰性，非甲基化強(qiáng)陽性；LnCaP細(xì)胞的甲基化及非甲基化均呈陽性；PC-3細(xì)胞呈甲基化強(qiáng)陽性，非甲基化陰性。使用含有濃度為10μmol/L的5-氮雜-2＇-脫氧胞苷培養(yǎng)基分別培養(yǎng)72小時之后，正常前列腺上皮細(xì)胞仍呈甲基化陰性，非甲基化強(qiáng)陽性；LnCa

4、P細(xì)胞的甲基化較前減弱，非甲基化增強(qiáng)；PC-3細(xì)胞的甲基化程度明顯減弱，并出現(xiàn)較強(qiáng)的非甲基化。
　　 2．RT-PCR結(jié)果顯示：E_cadherin mRNA水平存在差異，在正常人前列腺上皮細(xì)胞表達(dá)水平最高，且隨著藥物作用濃度的增加和作用時間的延長，其mRNA未發(fā)現(xiàn)明顯改變。LnCaP細(xì)胞中的E_cadherin mRNA水平次之，而PC-3細(xì)胞則幾乎不表達(dá)；同時，其mRNA的表達(dá)隨著藥物濃度的增加和作用時間的延長而逐漸增強(qiáng)，其

5、中又以PC-3細(xì)胞中增強(qiáng)最為明顯。
　　 3．Western blot結(jié)果顯示：E_cadherin蛋白表達(dá)情況與mRNA表達(dá)結(jié)果相一致。正常人前列腺上皮細(xì)胞隨著藥物濃度的增加和作用時間的延長，E_cadherin蛋白未發(fā)現(xiàn)明顯改變。LnCaP細(xì)胞及PC-3細(xì)胞E_cadherin蛋白的表達(dá)隨著藥物濃度的增加和作用時間的延長而逐漸增強(qiáng)，其中PC-3細(xì)胞表現(xiàn)更為明顯。
　　 4．侵襲性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：正常人前列腺上皮細(xì)胞未發(fā)

6、現(xiàn)侵襲性，PC-3細(xì)胞的侵襲性明顯高于LnCaP細(xì)胞。分別加入濃度為10μmol/L的5-氮雜-2＇-脫氧胞苷作用72小時之后，LnCaP細(xì)胞的侵襲性下降，PC-3細(xì)胞的侵襲性明顯下降。
　　 結(jié)論:
　　 1．激素非依賴性前列腺癌的E_cadherin基因啟動子CpG島存在明顯的甲基化，E_cadherin的表達(dá)缺失。
　　 2．5-氮雜-2＇-脫氧胞苷可降低激素非依賴性前列腺痛的啟動子甲基化程度，并促進(jìn)E_c