PCF經(jīng)ROS-UCP2-cytoC信號通路對UVA誘導的HaCaT細胞凋亡的調(diào)控.pdf

1、目的:復制8J·cm-2UVA輻射損傷HaCaT角質(zhì)形成細胞的凋亡模型,探究線粒體解偶聯(lián)蛋白2(UCP2)在UVA誘導的HaCaT細胞凋亡中的調(diào)控作用,確定線粒體解偶聯(lián)蛋白2對活性氧的調(diào)控,從線粒體呼吸鏈復合酶、活性氧(ROS)、線粒體解偶聯(lián)蛋白2(UCP2)、細胞色素C(cytoC)、凋亡蛋白酶激活因子(Apaf-1)的角度,研究扇貝多肽(PCF)保護UVA誘導的HacaT細胞凋亡的分子機制。方法:復制8J·cm-2 UVA照射HaC

2、aT細胞后18h的最佳凋亡模型,實驗設(shè)計分為:對照組、UVA模型組、PCF組(5.69,2.84,1.42 mmol·L-1PCF)、抑制劑組(5mmol·L-1 NAC)。采用瓊脂糖凝膠電泳法和Hochest33258熒光染色觀察UVA引起的細胞凋亡形態(tài)學變化及細胞凋亡率；2,7-二氯氫化熒光素二酯熒光探針,檢測PCF對UVA損傷細胞后ROS生成量的影響；RT-PCR檢測胞漿谷胱甘肽過氧化物酶(GPx)、過氧化氫酶(CAT)mRNA的

3、表達；免疫印跡法檢測胞漿超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD),UCP2,凋亡蛋白酶激活因子(Apaf-1),細胞色素C(cytoC)的蛋白表達；用紫外分光光度法測定呼吸鏈復合酶1(NADH:Q還原酶)的活性。結(jié)果:UVA模型組HaCaT細胞出現(xiàn)明顯的凋亡梯形條,細胞核發(fā)生明顯固縮,PCF組梯形條帶明顯減少同時還提高了Cu,Zn—SOD、GPx和CAT的表達；UVA輻射HaCaT細胞后18h凋亡模型細胞中的ROS含量明顯升高；1.42-5

4、.69 mmol·L-1劑量范圍內(nèi)的PCF可明顯抑制UVA引起的細胞內(nèi)活性氧的產(chǎn)生；UVA模型組中UCP2的表達明顯增高而正常對照組及預先加入NAC活性氧清除劑的細胞中UCP2幾乎不表達,1.42—5.69 mmol·L-1劑量范圍內(nèi)的PCF可劑量依賴性提高UCP2的蛋白表達；UVA模型組cytoC向胞漿的釋放量明顯增多,Apaf-1表達量升高1.42—5.69 mmol·L-1劑量范圍內(nèi)的PCF可明顯抑制cytoC向胞漿釋放及Apaf

5、-1蛋白的表達；UVA模型組呼吸連復合酶Ⅰ的活性明顯下降PCF組可以劑量依賴性提高復合酶的活性抑制UVA誘導的HaCaT細胞凋亡。結(jié)論:PCF可以通過提高細胞內(nèi)的過氧化物酶(Cu,Zn-SOD、GPx和CAT)的表達抑制UVA誘導的HaCaT細胞凋亡線粒體解耦蛋白2參與了UVA誘導的HaCaT細胞凋亡的調(diào)控機制,UVA輻射損傷HaCaT細胞,細胞中會產(chǎn)生大量的ROS,ROS可以激活UCP2的表達,PCF可以經(jīng)ROS／UCP2／cytoC