齊墩果酸經(jīng)CoQ10-UCP2-ROS-Cyto-C通路抑制大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖.pdf

1、目的：
　　復(fù)制氧化低密度脂蛋白（oxygenized low density lipoprotein,ox-LDL）誘導(dǎo)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）的增殖模型，研究齊墩果酸（oleanolic acid,OA）對VSMCs增殖的抑制作用。
　　方法：
　　復(fù)制ox-LDL（50μg/ml）誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖模型，實(shí)驗(yàn)分組為：正常對照組，ox-LDL模型組，O

2、A組（5μM，20μM，35μM），OA組均給藥預(yù)保護(hù)12 h后加入ox-LDL造模24 h，RT-PCR和western blot技術(shù)檢測各組細(xì)胞中CoQ10、UCP2、Cyto-C的mRNA及蛋白水平，ROS檢測試劑盒檢測細(xì)胞內(nèi)ROS表達(dá)變化。RT-PCR技術(shù)檢測ox-LDL（50μg/ml）對細(xì)胞的經(jīng)時(shí)（0，3，6，12，24 h）變化。驗(yàn)證CoQ10/UCP2/ROS/Cyto-C級聯(lián)通路實(shí)驗(yàn)分組為：ox-LDL模型組、模型+s

3、iCoQ10/siUCP2/京尼平、OA（35μM）組、OA（35μM）+siCoQ10/siUCP2/京尼平組，RT-PCR技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染效率和目的基因mRNA表達(dá)水平。采用SPSS17.0軟件統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
　　結(jié)果：
　　CCK-8檢測結(jié)果顯示：
　?、?0μg/ml ox-LDL成功復(fù)制VSMCs增殖模型，而在加入5，20，35μM OA預(yù)保護(hù)12 h后對細(xì)胞存活率均有明顯的抑制作用（p＜0.05）；

4、　?、?00 ng si-RNA組作用48 h對細(xì)胞的存活率沒有影響（p＞0.05）。3，6，12，24 h CoQ10與UCP2 mRNA表達(dá)量上升，而Cyto-C mRNA表達(dá)量下降，提示CoQ10與UCP2 mRNA表達(dá)量成正相關(guān)，CoQ10、UCP2與Cyto-C mRNA的表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)。模型組CoQ10、UCP2mRNA和蛋白水平較正常組均上升（p＜0.05），Cyto-C mRNA和蛋白水平，細(xì)胞內(nèi)ROS含量較正常組均下降

5、（p＜0.05），提示CoQ10、UCP2與細(xì)胞增殖呈正相關(guān)，Cyto-C、ROS與細(xì)胞增殖呈負(fù)相關(guān)。OA組CoQ10、UCP2 mRNA和蛋白水平較模型組均下降（p＜0.05），Cyto-C mRNA和蛋白水平，細(xì)胞內(nèi)ROS含量較模型組均上升（p＜0.05），提示OA可通過下調(diào)CoQ10、UCP2，上調(diào)ROS、Cyto-C抑制VSMCs異常增殖。經(jīng)si-CoQ10處理后，模型組中CoQ10 mRNA表達(dá)沉默（沉默效率＞50%），UCP

6、2 mRNA表達(dá)較正常組明顯下降（p＜0.05），提示CoQ10正調(diào)控UCP2；OA組中CoQ10 mRNA表達(dá)較模型組降低，UCP2 mRNA表達(dá)較模型組降低（p＜0.05），提示OA可通過抑制CoQ10下調(diào)UCP2。經(jīng)si-UCP2/京尼平處理后，模型組中UCP2 mRNA表達(dá)沉默（沉默效率＞50%）/下降，細(xì)胞內(nèi) ROS表達(dá)較正常組明顯上升（p＜0.05），Cyto-C mRNA表達(dá)明顯上升（p＜0.05），提示UCP2負(fù)調(diào)控RO