氟伐他汀對高糖環(huán)境中腎小球系膜細胞胞外信號調(diào)節(jié)激酶表達影響的干預(yù)研究.pdf

1、目的：糖尿病腎病(diabeticnephropathy,DN)是糖尿病常見和嚴(yán)重的慢性微血管并發(fā)癥，它已成為終末期腎功能衰竭(end-stagerenalfailure，ESRF)的主要原因之一，因而探索糖尿病腎病的發(fā)病機制及其防治方法是當(dāng)今腎病學(xué)者熱切關(guān)注的課題。近年研究發(fā)現(xiàn)糖尿病狀態(tài)下，糖代謝異常、腎臟血流動力學(xué)改變以及各種細胞因子的作用均可引起腎臟細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路發(fā)生改變，在一定程度上導(dǎo)致和加速了DN的發(fā)生、發(fā)展。絲裂原活化蛋

2、白激酶(mitogenactivatedproteinkinase，MAPK)是廣泛存在于真核細胞內(nèi)的一類是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，是將細胞外有關(guān)信號傳導(dǎo)到細胞核內(nèi)部而引起多種細胞反應(yīng)的主要傳遞者，主要包括四條傳導(dǎo)通路，即胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellularsignalregulatedproteinkinase，ERK)通路，c-jun氨基末端激酶(c-junN-terminalkinase,JNK)通路，P38通路即ER

3、K5通路。在不同胞外刺激下，相應(yīng)的MAPK通路被激活，從而使細胞對各種各樣的胞外刺激作出反應(yīng)，其中ERK通路是經(jīng)典的MAPK通路，通常介導(dǎo)激素和生長因子引起的細胞反應(yīng)，即激素和生長因子通過Ras依賴的信號通路激活ERK，然后磷酸化轉(zhuǎn)錄因子，促進c-fos和其他生長反應(yīng)基因的表達，最后引起細胞的增殖和分化。 血脂代謝紊亂常伴隨糖尿病一起發(fā)生，高血脂可作為獨立危險因素引起腎臟損害。HMG-CoA還原酶抑制劑(hydroxy-meth

4、yl-glutarylcoenzymeAreducaseinhibitor,HRI)，又稱他汀類藥物，是目前臨床應(yīng)用最為廣泛和有效的降脂藥物，在糖尿病動物模型和臨床試驗研究中均發(fā)現(xiàn)其具有腎臟保護作用，晚近研究提示這種保護作用不完全依賴于HRI的降脂特性，但對其具體作用機制尚不完全清楚。 本課題應(yīng)用高糖刺激體外培養(yǎng)的大鼠腎小球系膜細胞，在除外高脂血癥這個影響因素的條件下，從細胞與分子水平觀察系膜細胞中ERK活性的變化，并給予HMG

5、-CoA還原酶抑制劑氟伐他汀(fluvastatin)進行干預(yù)，探討ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在DN發(fā)生發(fā)展中的作用以及氟伐他汀可能的腎臟保護作用機制，為闡明DN的發(fā)病機制及尋找防治方法提供實驗性理論依據(jù)。 結(jié)果：1.細胞培養(yǎng)結(jié)果：倒置相差顯微鏡下可見MC呈梭形、不規(guī)則星形或三角形的、樹枝形，當(dāng)細胞密集時可重疊生長，胞漿多突起，有大量微絲樣結(jié)構(gòu)，核居中央，多呈圓形或橢圓形；免疫細胞化學(xué)顯示胞漿結(jié)蛋白陽性，角蛋白、Ⅷ因子陰性；2.west

6、ernblot結(jié)果顯示：12h時，HG組pERK1/2蛋白的表達量已較NG組明顯增高，隨培養(yǎng)時間延長其表達呈上升趨勢(p＜0.01)，氟伐他汀干預(yù)組較同時期高糖組降低明顯，差異有顯著性(P＜0.01)；3.RT-PCR結(jié)果表明HG組TGF-β1mRNA水平在12h時已較正常組有所升高(P＜0.01)，隨高糖干預(yù)時間的延長，TGF-β1mRNA升高更為顯著(P＜0.01)，且呈遞增趨勢，72h時表達量最多(p＜0.01)，而HG+Flu組

7、較同時相點HG組明顯降低(P＜0.01)。4.放免法結(jié)果：12h、24h時三組細胞上清液中Ⅳ型膠原的含量無明顯差異(p＞0.05)，48h時HG組較NG組增高(p＜0.05)，72h時增高更為明顯(P＜0.01)，而HG+Flu組與同時期HG組相比其表達降低，差異有顯著性(p＜0.01)。 結(jié)論：高糖環(huán)境下培養(yǎng)的系膜細胞中pERK1/2的表達上調(diào)，TGF-β1mRNA、Ⅳ型膠原合成增多，提示系膜細胞ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激活可能參與