GDNF及其受體在大鼠閉合性顱腦損傷中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：顱腦創(chuàng)傷(traumaticbraininjury,TBI)是神經(jīng)外科的常見(jiàn)病，其致殘率和病死率非常高，膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(glialcellline-derivedneurotrophicfactor,GDNF)對(duì)多種神經(jīng)元具有營(yíng)養(yǎng)作用，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)復(fù)制Marmarou’s大鼠閉合性顱腦損傷模型，采用組織芯片及免疫組化技術(shù)，研究閉合性顱腦損傷后不同時(shí)間GDNF及其受體GFRα-1、Ret在腦組織不同部位的表達(dá)情況，為研究GD

2、NF在閉合性顱腦損傷中的神經(jīng)保護(hù)作用提供理論與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：采用清潔級(jí)雄性SD大鼠55只，體重350-400g。隨機(jī)分為正常對(duì)照組、手術(shù)對(duì)照組及損傷后1h組、2h組、4h組、8h組、12h組、24h組、48h組、72h組和5d組。 復(fù)制Marmarou’s大鼠落體打擊損傷模型。分別于損傷后不同時(shí)間行4％多聚甲醛灌注固定、取材。HE、桔花青(Einarson氏)尼氏體染色法觀察腦損傷病理改變。用組織芯片儀制作組織芯片，

3、SP法檢測(cè)大腦皮質(zhì)、海馬和腦干神經(jīng)細(xì)胞GDNF、GFRα-1、Ret的表達(dá)情況。采用Mias2000圖像分析系統(tǒng)采集并計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。全部數(shù)據(jù)均采用SPSS11.5forwindows分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，以P＜0.05為顯著性差異的水準(zhǔn)。 結(jié)果： 1病理學(xué)改變： 損傷組可見(jiàn)腦組織水腫、蛛網(wǎng)膜下腔出血及腦挫傷。部分神經(jīng)細(xì)胞胞體固縮、深染，細(xì)胞核小而深染；部分神經(jīng)細(xì)胞胞體腫脹，胞漿變空，核淡染。 2GDNF

4、免疫組織化學(xué)染色結(jié)果： 對(duì)照組皮質(zhì)、海馬、腦干部位均有少量免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)，陽(yáng)性物質(zhì)定位于細(xì)胞漿和細(xì)胞核。 損傷組皮質(zhì)、海馬、腦干部位GDNF免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目增多，以膠質(zhì)細(xì)胞為主，免疫反應(yīng)陽(yáng)性物質(zhì)增加，主要位于打擊、對(duì)沖部位皮質(zhì)，海馬以CA3、CA4區(qū)表達(dá)明顯。 頂葉皮質(zhì)GDNF免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)于損傷后1h開(kāi)始增多，2h達(dá)最大值，然后逐漸降低。與對(duì)照組比較，損傷后1h-12h組差別有極顯著意義(p＜0.

5、01)。損傷后24h-5d組與對(duì)照組比較差別有顯著意義(p＜0.05)。 海馬GDNF免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)于損傷后1h開(kāi)始增多，損傷后2h達(dá)高峰，然后逐漸降低。與對(duì)照組比較，損傷后1h-24h組差別有極顯著意義(p＜0.01)，損傷后48h組與對(duì)照組比較差別有顯著意義(p＜0.05)，損傷后72h-5d組差別無(wú)顯著意義(p＞0.05)。 腦干GDNF免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)于損傷后1h開(kāi)始增多，損傷后2h達(dá)高峰，然后逐漸降低。與

6、對(duì)照組比較，損傷后1h-12h組差別有極顯著意義(p＜0.01)，損傷后24h-48h組與對(duì)照組比較差別有顯著意義(p＜0.05)，損傷后72h-5d組差別無(wú)顯著意義(p＞0.05)。 3GFRα-1免疫組織化學(xué)染色結(jié)果： 對(duì)照組皮質(zhì)、海馬、腦干部位均有少量GFRα-1免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)，陽(yáng)性物質(zhì)定位于細(xì)胞漿和細(xì)胞核。 損傷組皮質(zhì)、海馬、腦干部位GFRα-1免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目增多，免疫陽(yáng)性物質(zhì)增加，膠質(zhì)細(xì)胞表

7、達(dá)尤為明顯，主要位于打擊、對(duì)沖部位皮質(zhì)，海馬CA3、CA4區(qū)及齒狀回表達(dá)明顯。 頂葉皮質(zhì)GFRα-1免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)于損傷后1h表達(dá)開(kāi)始增多，4h達(dá)最大值，然后逐漸降低。與對(duì)照組比較，損傷后1h-12h組差別有極顯著意義(p＜0.01)，損傷后24h-5d組與對(duì)照組比較差別無(wú)顯著意義(p＞0.05)。 海馬GFRα-1免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)于損傷后1h開(kāi)始增多，損傷后4h達(dá)高峰，然后逐漸降低。與對(duì)照組比較，損傷后1h-24

8、h組差別有極顯著意義(p＜0.01)，損傷后48h組與對(duì)照組比較差別有顯著意義(p＜0.05)，損傷后72h-5d組與對(duì)照組比較差別無(wú)顯著意義(p＞0.05)。 腦干GFRα-1免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)于損傷后1h開(kāi)始增多，損傷后4h達(dá)高峰，然后逐漸降低。與對(duì)照組比較，損傷后1h-12h組差別有極顯著意義(p＜0.01)，損傷后24h組與對(duì)照組比較差別有顯著意義(p＜0.05)，48h-5d組與對(duì)照組比較差別無(wú)顯著意義(p＞0.05)

9、。 4Ret免疫組織化學(xué)染色結(jié)果： 對(duì)照組皮質(zhì)、海馬、腦干部位均有少量Ret免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)，陽(yáng)性物質(zhì)定位于細(xì)胞漿和細(xì)胞核。 損傷組皮質(zhì)、海馬、腦干部位Ret免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目增多，免疫陽(yáng)性物質(zhì)增加，膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)尤為明顯，主要位于頂葉皮質(zhì)、對(duì)沖部位，海馬CA3、CA4區(qū)表達(dá)明顯。腦干免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞增多。 頂葉皮質(zhì)Ret免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)于損傷后1h表達(dá)開(kāi)始增多，4h達(dá)最大值，然后逐漸降

10、低。與對(duì)照組比較，損傷后1h-12h組差別有極顯著意義(p＜0.01)，損傷后24h-5d組與對(duì)照組比較差別無(wú)顯著意義(p＞0.05)。 海馬Ret免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)于損傷后1h開(kāi)始增多，損傷后4h達(dá)高峰，然后逐漸降低。與對(duì)照組比較，損傷后1h-12h組差別有極顯著意義(p＜0.01)，損傷后24h組與對(duì)照組比較差別有顯著意義(p＜0.05)，損傷后48h-5d組與對(duì)照組比較差別無(wú)顯著意義(p＞0.05)。 腦干Ret免

11、疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)于損傷后1h開(kāi)始增多，損傷后4h達(dá)高峰，然后逐漸降低。與對(duì)照組比較，損傷后1h-24h組差別有極顯著意義(p＜0.01)，損傷后48h-5d組與對(duì)照組比較差別無(wú)顯著意義(p＞0.05)。 結(jié)論： 1正常時(shí)皮質(zhì)、海馬、腦干部位均有少量GDNF免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)。腦損傷后皮質(zhì)、海馬、腦干部位GDNF表達(dá)增強(qiáng)，免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目增多，損傷后1h皮質(zhì)、海馬、腦干部位GDNF表達(dá)開(kāi)始增強(qiáng)，2h達(dá)高峰，然后逐漸降

12、低。 2正常時(shí)皮質(zhì)、海馬、腦干部位均有少量GFRα-1免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)。腦損傷后皮質(zhì)、海馬、腦干部位GFRα-1表達(dá)增強(qiáng)，免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目增多，損傷后1h皮質(zhì)、海馬、腦干部位GFRαt-1表達(dá)開(kāi)始增強(qiáng)，4h達(dá)高峰，然后逐漸降低。 3正常時(shí)皮質(zhì)、海馬、腦干部位均有少量Ret免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)。腦損傷后皮質(zhì)、海馬、腦干部位Ret表達(dá)增強(qiáng)，免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目增多，損傷后1h皮質(zhì)、海馬、腦干部位Ret表達(dá)開(kāi)始增強(qiáng)，4