FeSOD-ScFv的構(gòu)建、表達、復性及其與視黃酸聯(lián)合給藥對肺腺癌細胞活性的影響.pdf

1、目前，癌癥已經(jīng)是危害人類生命健康的首要疾病。近年來，全世界癌癥發(fā)病每年超過1000萬人，每年死亡約700萬人。鑒于此，有效抗癌藥物的研究刻不容緩。FeSOD-ScFv(Superoxide dismutase-single chain variable fragment)是一種雙功能蛋白，能靶向性作用于肺腺癌細胞，然而FeSOD-ScFv通過胞吞作用進入細胞后，大部分被溶酶體消化，只有少部分發(fā)揮作用，這就減弱了FeSOD的抗腫瘤效果。研

2、究表明，視黃酸(Retinoic acid，RA)通過改變內(nèi)吞小泡的胞內(nèi)途徑，降低內(nèi)吞小泡被溶酶體消化的概率，增強某些藥物的藥效。
　　 本論文通過定點突變技術(shù)將本實驗室保存的已突變的FeSOD-ScFv質(zhì)?；貜屯蛔?，然后重新構(gòu)建表達載體pET-28a-FeSOD-ScFv，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21中。構(gòu)建好的工程菌經(jīng)正交試驗得到最佳表達條件為：37℃、0.5 mmol/L IPTG濃度下誘導表達7小時；SDS-PAGE分析表明目

3、的蛋白以包涵體形式表達，表達的目的蛋白占全菌蛋白總量的53％。包涵體經(jīng)提取、純化，通過尿素線性梯度透析復性后，蛋白的比活約為620U/mg，回收率為84.3％。將復性后的FeSOD-ScFv與視黃酸單獨及聯(lián)合作用肺腺癌細胞A549，結(jié)果表明FeSOD-ScFv在體外具有顯著的抗腫瘤作用，且視黃酸顯著提高FeSOD-ScFv對肺腺癌細胞A549的抑制作用，抑制效果提高87％。
　　 本研究回復突變fesod-ScFv基因，成功構(gòu)建