BAC-,5--ScFv的表達(dá)、純化、復(fù)性及活性檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、　　鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)是我國(guó)南方高發(fā)惡性腫瘤之一，嚴(yán)重危害了人民的健康。利用單克隆抗體對(duì)腫瘤進(jìn)行放射免疫顯像和治療在腫瘤的診治領(lǐng)域中展現(xiàn)了廣闊的前景。本實(shí)驗(yàn)室利用基因重組技術(shù)構(gòu)建了抗鼻咽癌單克隆抗體BAC5的單鏈抗體(single-chainFvantibodyfragement，ScFv)的原核表達(dá)載體，并轉(zhuǎn)入大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，得到了以包涵體形式表達(dá)的無(wú)活性的BAC5-ScFv。如何

2、對(duì)其進(jìn)行純化，復(fù)性，使其成為有免疫活性的抗體應(yīng)用于鼻咽癌的放射免疫顯像和治療有重要的意義。本文主要內(nèi)容如下：1.本實(shí)驗(yàn)對(duì)轉(zhuǎn)有pET22b-ScFv質(zhì)粒的細(xì)菌BL21(DE3)進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，得到以包涵體形式表達(dá)的BAC5-ScFv，分子量為31KD左右，包涵體中BAC5-ScFv占70％。2.用Ni-NTAHisBind親和層析柱純化變性的單鏈抗體蛋白，SDS-PAGE檢測(cè)其純度達(dá)90％。3.變性單鏈抗體的最佳復(fù)性液的組成為：50mmol

3、/LTris-HCL，1mmol/LEDTA，0.3mol/LNacl，1mmol/LGSSG，1mmol/LGSH，0.4mol/LL-精氨酸pH8.0。稀釋、透析和尿素梯度凝膠柱三種復(fù)性方法對(duì)純化的變性單鏈抗體進(jìn)行復(fù)性的蛋白回收率分別為：35.64％、21.46％和59.32％。4.免疫細(xì)胞化學(xué)染色法和westernblot檢測(cè)復(fù)性后的BAC5-ScFv有和BAC5單克隆抗體一樣的結(jié)合鼻咽癌細(xì)胞株CNE2的免疫活性。其滴度比相同濃度