兩種急性肺損傷模型大鼠炎性反應(yīng)、激素受體mRNA水平及激素干預(yù)效果的差異.pdf

1、目的：急性肺損傷(acute lung iniury，ALI)/急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome，ARDS)是由各種致病因素引起的肺泡上皮細(xì)胞及肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞屏障功能喪失，從而導(dǎo)致的缺氧性呼吸衰竭。ALI/ARDS的發(fā)生與一些臨床疾病有關(guān)，包括肺炎、誤吸等導(dǎo)致的直接肺損傷以及創(chuàng)傷、敗血癥等導(dǎo)致的間接肺損傷，其中敗血癥和誤吸是其最常見的病因。人類ALI/ARDS的發(fā)生、發(fā)展極為

2、復(fù)雜，極少由單一致傷因素所致。與一次打擊模型相比，二次打擊模型能夠更加準(zhǔn)確地反映ALI/ARDS患者共同的疾病和危險因素，因此研究二次打擊ALI動物模型對于ALI發(fā)病機(jī)理的闡明與干預(yù)效果評價具有重要意義。 炎癥性細(xì)胞因子和化學(xué)介質(zhì)的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)在介導(dǎo)、擴(kuò)大、維持肺損傷方面起重要作用，同時產(chǎn)生的抗炎性細(xì)胞因子能抵抗促炎性細(xì)胞因子的效應(yīng)從而減輕炎癥反應(yīng)的強(qiáng)度。促炎和抗炎性細(xì)胞因子的平衡是闡明這一破壞性臨床綜合征發(fā)病機(jī)理的重要方面。雖然大

3、量研究已證實(shí)了炎癥反應(yīng)在ALI發(fā)病中的作用，但對不同打擊所致ALI炎癥機(jī)制差異方面的認(rèn)識較少。糖皮質(zhì)激素(glucocorticoids，GCs)具有強(qiáng)大的抗炎特性，在ALI中的應(yīng)用已有多年的歷史，但臨床發(fā)現(xiàn)不同打擊的ALI患者對激素治療的反應(yīng)存在較大差異，其具體機(jī)制有待于進(jìn)一步探討。GCs通過與細(xì)胞內(nèi)廣泛分布的糖皮質(zhì)激素受體(glucocorticoid receptor，GR)結(jié)合而發(fā)揮大部分效應(yīng)，GR通過細(xì)胞內(nèi)基因組機(jī)制由GRmR

4、NA翻譯合成，故GRmRNA水平的變化可以導(dǎo)致GR表達(dá)水平的異常，從而影響GCs療效的發(fā)揮。這可能是導(dǎo)致激素治療效果差異的機(jī)制之一。因此，本研究復(fù)制了脂多糖(Liopolysaccharide，LPS)一次打擊及LPS-鹽酸(Hydrochloric acid，HCl)二次打擊ALI動物模型，比較細(xì)胞因子水平、GRmRNA表達(dá)及GCs干預(yù)對二者的影響以探討不同打擊所致ALI炎癥機(jī)制、激素治療效果的差異及其潛在機(jī)理。 方法：健康雄

5、性SD大鼠48只，隨機(jī)分為6組：①NS組：尾靜脈注射生理鹽水1.2ml/kg，4小時后氣管內(nèi)緩慢滴注生理鹽水0.5ml/kg，②LPS組：尾靜脈注射LPS(8mg/kg)，③LPS-HCl組：尾靜脈注射LPS(4mg/kg)，4小時后氣管內(nèi)緩慢滴注HCl(pHl.8，0.5ml/kg)，④NS+Dex組，⑤LPS+Dex組，⑥LPs-HCl+Dex組，每組8只動物。④、⑤、⑥三組為激素干預(yù)組，造模后立即腹腔注射Dex(2mg/kg)。

6、 模型復(fù)制后4小時，10％水合氯醛腹腔注射麻醉(4ml/kg)，開胸處死動物后立即心臟穿刺采血，收集血液，離心(3000rpm，4℃，10min)，吸取上清，一80℃保存，檢測血清中TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10的含量。取右肺前葉肺組織100mg，提取組織總RNA，用R17-PCR法檢測肺組織中GRmRNA的相對含量。取右肺下葉，10％中性福爾馬林溶液固定，常規(guī)石蠟包埋做病理切片，觀察肺組織病理形態(tài)學(xué)變化并評分。取右

7、肺后葉及副葉進(jìn)行W/D的測定(80℃，48h)。經(jīng)氣管插管行左肺支氣管肺泡灌洗，取支氣管肺泡灌洗液(BALF)，離心(1200rpm，4℃，10min)，吸取上清，-80℃保存，檢測BALF中TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10的含量和蛋白水平。細(xì)胞沉淀懸浮于200微升生理鹽水中，進(jìn)行白細(xì)胞計數(shù)。 結(jié)果：(1)LPS組和LPS-HCl組肺W/D、BALF中細(xì)胞總數(shù)及蛋白含量均高于NS組(P<0.05)。除BALF中蛋白含

8、量這一指標(biāo)LPS-HCl組明顯高于LPS組外，其它兩個指標(biāo)在兩個肺損傷模型組之間無差別(P>0.05)。這些指標(biāo)在LPS+Dex組均顯著下降(P<0.05)，而LPS-HCI+Dex組只有肺W/D下降(P<0.05)。(2)LPS組和LPS-HCl組光鏡下肺組織病理評分明顯高于NS組(P<0.05)，而兩個肺損傷模型組之間無差別(P>0.05)。肺組織病理評分在LPS+Dex組和LPS-HCI+Dex組均顯著低于相應(yīng)模型組(P<0.01

9、)，但LPS-HCI+Dex組病理評分明顯高于LPS+Dex組(P<0.01)。(3)各組血清中IL-1β的含量均未測得，LPS組和LPS-HCl組血清和BALF中TNF-α含量及BALF中IL-1β的含量顯著高于NS組(P<0.01)。LPS+Dex組血清和BALF中TNF-α含量及BALF中IL-1β的含量均低于LPS組(P<0.05)。LPS-HCI+Dex組血清和BALF中TNF-α含量低于LPS-HCl組(P<0.05)。(4

10、)LPS和LPS-HCl組血清和BALF中IL-4、IL-10含量均顯著高于NS組(P<0.05)。LPS+Dex組和LPS-HCI+Dex組血清和BALF中IL-10含量均較相應(yīng)模型組升高(P<0.05 )。(5)LPS組和LPS-HCl組肺組織中GRmRNA水平較NS組顯著降低(P<0.01)。Dex能明顯上調(diào)兩模型組的GRmRNA水平(P<0.05)，而LPS+Dex組的GRmRNA水平顯著高于LPS-HCI+Dex組(P<0.0

11、1)。 結(jié)論：(1)ALI/ARDS發(fā)展過程中GRmRNA表達(dá)減少，引起受體水平上的腎上腺皮質(zhì)功能不全，削弱了抗炎機(jī)制，這可能是肺損傷發(fā)生發(fā)展中的一個重要環(huán)節(jié)。 (2)一次打擊及二次打擊所致ALI/ARDS細(xì)胞因子水平方面存在一定的差異，說明ALI/ARDS的炎癥機(jī)制與致病因素是緊密相連的。 (3)激素治療一次打擊及二次打擊ALJ/ARDS的療效不同，雖然激素能在一定程度上減輕兩組的肺損傷程度，但LPS組的治療