肺內外感染致急性肺損傷病理改變與激素干預效果差異的研究.pdf

1、目的：急性肺損傷（acute lung injury，ALI）/急性呼吸窘迫綜合征（acute respiratory distress syndrome，ARDS）是機體在遭受各種侵襲（如創(chuàng)傷、休克、感染、中毒等）后發(fā)生的急性肺間質性炎和肺泡.毛細血管膜損傷，導致通透性肺水腫、肺動脈高壓、肺內微血栓形成，以進行性呼吸困難和難以糾正的低氧血癥為主要表現的臨床綜合征。ARDS是ALI的嚴重階段，二者具有性質相同但程度不同的病理生理改變。<

2、br>　　 ALI/ARDS病因復雜，按原發(fā)病的不同將其分為肺內源性急性肺損傷（ARDSp）和肺外源性急性肺損傷（ARDSexp），其中肺炎是引起ARDSp的最常見原因，敗血癥是引起ARDSexp的最常見原因。兩者肺損傷機制差異并不明確。糖皮質激素（glucocorticoids，GCs）具有強大的抗炎抗免疫作用，可以通過多種機制來抑制炎癥反應，改善血管通透性，減輕肺水腫，從而影響ALI的發(fā)生和發(fā)展。GCs用于ALI的治療已有很長的歷

3、史，但在臨床實踐中發(fā)現不同病因導致的ALI患者對激素治療的反應存在較大差異。
　　 因此，本研究復制了肺內、外感染兩種病因導致的ALI/ARDS的動物模型，分析比較二者在病理改變、炎性介質、激素干預效果等方面的差異，探討ALI發(fā)病機制、激素干預效果與機理，為臨床個體化治療肺內外感染導致的ARDS提供理論依據。
　　 方法：健康雄性SD大鼠48只，隨機分為6組，每組8只動物：①正常對照組（NS組）：尾靜脈注射生理鹽水1ml

4、②肺外感染組（LPS組）：尾靜脈注射LPS（8mg/kg）③肺內感染組（E.coli組）：氣管內緩慢滴注E.coli混懸液（3ml/kg）④正常對照+地塞米松組（NS+Dex組）⑤肺外感染組+地塞米松組（LPS+Dex組），⑥肺內感染組+地塞米松組（E.coli+Dex組），④、⑤、⑥三組為激素干預組，造模后立即腹腔注射Dex（2mg/kg）。
　　 E.coli組及E.coli+Dex組模型復制24小時后取材，其余各組模型復制

5、4小時后取材。將動物以10％水合氯醛（3ml/kg）腹腔注射麻醉，固定在手術臺上。股動脈穿刺采血，收集血液，離心（3000 rpm，4℃，10min），吸取上清，分裝，-80℃保存，用于細胞因子測定。開胸處死動物，暴露肺組織，止血鉗夾閉右主支氣管后，將右肺完整切除，取右肺上葉肺組織用于濕/干重比檢測，取右肺中葉肺組織用10％中性福爾馬林溶液固定，留做病理及免疫組織化學檢查，右后葉用4％戊二醛固定，留做透射電鏡檢查。分離出氣管，經氣管插管

6、行左肺支氣管肺泡灌洗，取支氣管肺泡灌洗液（BALF），離心（1200 rpm，4℃，10min），細胞沉淀用于細胞計數檢測，上清液分裝，-80℃保存，用于蛋白含量及細胞因子的測定。
　　 結果：（1）LPS組和E.coli組光鏡下肺組織病理評分差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），但E.coli組主要表現在肺組織結構的毀損，氣道上皮壞死脫落，而LPS組主要表現為肺泡間隔的增寬和血管充血。LPS+Dex組病理評分顯著低于LPS組（P<

7、0.01）。電鏡觀察顯示兩模型組均有超微結構的改變，E.coli組重于LPS組，LPS+Dex組超微結構的改變較LPS組明顯減輕，而E.coli+Dex組與E.coli組比較無明顯差異。（2）E.coli組和LPS組肺W/D、BALF中細胞總數及蛋白含量均高于NS組（P<0.01），除肺W/D外，其它兩個指標在兩模型組之間有顯著差異（P>0.01）。這三個指標在LPS+Dex組均明顯下降（P<0.05），而E.coli+Dex組只有BA

8、LF中細胞總數及蛋白含量下降（P<0.01），E.coli+Dex組均明顯高于LPS+Dex組（P<0.01）。（3）E.coli組和LPS組血清和BALF中TNF-α及IL-1β的含量均顯著高于NS組（P<0.01），LPS組血清中TNF-α及IL-1β含量均明顯高于E.coli組（P<0.05），而E.coli組BALF中TNF-α及IL-1β含量均明顯高于LPS組（P<0.01），LPS+Dex組血清和BALF中TNF-α及IL-

9、1β含量均低于LPS組（P<0.05），E.coli+Dex組血清和BALF中FNF-α及IL-1β含量無明顯變化（P<0.05）。（4）LPS組和E.coli組NF-κB陽性細胞比值（34.08±3.82，36.33±4.05）明顯高于NS組（3.11±1.10，P<0.01），LPS+Dex組NF-κB陽性細胞表達（26.14±3.91）較LPS組明顯降低（P<0.01），而E.coli+Dex組（35.1±4.22）較E.coli

10、組無明顯變化（P>0.05）。
　　 結論：1.氣道內注入大腸桿菌成功的復制了肺炎導致的內源性急性肺損傷模型。
　　 2.兩模型組雖然在病理損傷程度上相近，但在具體病理表現上存在一定差異，E.coli組主要表現在肺組織結構的毀損，氣道上皮壞死脫落，而LPS組主要變現為肺泡間隔的增寬和血管充血，肺組織結構破壞不明顯。電鏡下E.coli組病變重于LPS組。說明急性肺損傷的發(fā)生發(fā)展與其致病因素關系密切，不同病因所致的急性肺損傷